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铅暴露对SH—SY5Y细胞基因表达和总甲基化水平的影响

作　者: 王丽君
导　师: 黄畦
学　校: 华中科技大学
专　业: 内科学
关键词: 铅 SH—SY5Y 细胞基因表达甲基化
分类号: R114
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:研究铅暴露对SH—SY5Y 细胞APP、DNMT1基因表达和总甲基化水平的影响方法:1培养SH—SY5Y细胞,并将其暴露于不同浓度的醋酸铅溶液中,用MTT法检测不同剂量的醋酸铅对SH—SY5Y细胞生长曲线的影响。2实时荧光定量PCR检测暴露于不同浓度的醋酸铅溶液中的SH—SY5Y细胞,在分化过程中APP和DNMT1基因的mRNA表达水平。3根据DNA提取试剂盒操作说明提取SH—SY5Y细胞的基因组DNA。然后使用DNA总甲基化检测试剂盒进行DNA总甲基化的检测。结果:1随着培养基中铅浓度的增加,各组细胞MTT值随之减少。醋酸铅浓度为50μmol/l时,铅对SH—SY5Y细胞增值有抑制的作用。2和对照组相比,50μmol/l浓度的铅刺激下,APP mRNA变化倍数为1.09,上调了9%;DNMT1 mRNA变化倍数为0.91,下降了9%。100μmol/l浓度的铅刺激下,APP mRNA变化倍数为1.32,上升了了32%;DNMT1 mRNA变化倍数为0.72,下降了28%。3细胞在50μmol/l和100μmol/l铅中暴露七天,总DNA甲基化水平和对照组相比分别减少至6.8%和10.6%。结论:醋酸铅可能通过改变APP和DNMT1基因的表达来产生神经毒性,其机制可能与改变神经细胞基因的总甲基化水平有关。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-8
前言  8-11
1 实验材料  11-13
  1.1 主要的试剂和仪器设备  11
  1.2 主要溶液的配置  11-13
2 实验方法与步骤  13-19
  2.1 SH—SY5Y 细胞的培养  13-14
  2.2 MTT 法检测醋酸铅对 SH—SY5Y 细胞生长曲线的影响  14-15
  2.3 实时荧光定量 PCR 检测 SH—SY5Y 细胞分化过程中 APP 基因和 DNMT1 的 mRNA 表达水平  15-19
  2.4 总 DNA 甲基化分析  19
  2.5 统计方法  19
3 结果  19-23
  3.1 不同浓度的铅对 SH—SY5Y 细胞毒性的影响  19-20
  3.2 铅刺激下 SH—SY5Y 细胞淀粉前蛋白基因(APP)和 DNA 甲基化转移酶 1(DNMT1)基因的表达  20-23
4 讨论  23-28
参考文献  28-33
综述  33-46
  参考文献  42-46
致谢  46-47
附录  47

铅暴露对SH—SY5Y细胞基因表达和总甲基化水平的影响

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