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乳香、党参和当归提取物对雪旺细胞增殖及相关蛋白表达的影响

作　者: 陆子音
导　师: 于文会
学　校: 东北农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 中药提取物 雪旺细胞 细胞增殖 细胞周期蛋白表达
分类号: S853.74
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 17次
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内容摘要


实验通过乳香、党参和当归提取物分别对雪旺细胞（Schwann Cells, SCs）的干预作用，检测SCs的用药安全范围、细胞生长曲线、细胞周期时相的变化、细胞上清中脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor, BDNF)，神经细胞黏附分子（neural celladhesion molecule, NCAM）和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA）等指标，探讨中药促进创伤愈合中神经的修复作用。实验以SCs为研究对象，采用MTT比色法检测乳香提取物（ME）、党参提取物（CPE）和当归提取物（AE）对SCs的细胞毒作用和增殖范围；采用流式细胞术检测SCs细胞周期的变化和DNA含量的百分率；ELISA试剂盒检测SCs分泌脑源性神经营养因子（BDNF）、神经细胞黏附分子(NCAM）及增殖细胞核抗原（PCNA）的变化；采用荧光定量PCR法检测SCs中BDNF基因表达量的变化。实验结果表明：（1）乳香、党参及当归提取物对SCs的安全用药浓度分别是：62.5~8000mg/L、125～4000mg/L、125～2000mg/L。在三种中药成分干预SCs24h和48h后，MTT比色法检测结果显示乳香提取物浓度为125mg/L～500mg/L时与对照组相比增殖作用差异显著（P<0.05）；党参提取物浓度为1000～4000mg/L时与对照组相比增殖作用差异显著（P<0.05）；当归提取物浓度为500～2000mg/L时与对照组相比增殖作用差异显著（P<0.05），各中药成分干预SCs48h后对细胞增殖影响较小。（2）流式细胞仪检查结果证实，中药干预SCs24和48h，乳香提取物浓度为125、250和500mg/L时；党参提取物浓度为1000、2000和4000mg/L时；当归提取物浓度为500、1000和2000mg/L时与对照组相比DNA含量的百分率升高显著（P<0.05）。（3）ELISA检测结果显示对SCs分泌蛋白（BDNF、NCAM和PCNA）的量均有增加。（4）荧光定量PCR检测结果显示，乳香提取物药物浓度为125mg/L时SCs表达BDNF基因量增加显著；党参提取物药物浓度为2000mg/L时SCs表达BDNF基因量增加显著；当归提取物药物浓度为1000mg/L时SCs表达BDNF基因量增加显著。结论：中药提取物在适当范围内促进SCs增殖，不同浓度促增殖能力不同，其中乳香、党参和当归提取物浓度分别在125、2000和1000mg/L时效果最佳，并可使体外培养SCs的BDNF、NCAM和PCNA表达上调。

全文目录


摘要  8-9
Abstract  9-11
1 前言  11-19
  1.1 创伤愈合中神经修复的生物学研究进展  11-12
    1.1.1 神经损伤的病因学及病理学  11
    1.1.2 神经损伤的分类  11-12
    1.1.3 神经修复的影响因素  12
  1.2 雪旺细胞在创伤愈合神经修复中的作用  12-15
    1.2.1 雪旺细胞分泌多种细胞因子  13-14
    1.2.2 雪旺细胞分泌细胞外基质、细胞黏附分子  14-15
    1.2.3 雪旺细胞与再生轴突形成缝隙连接和直接连接  15
  1.3 中医对创伤愈合神经修复的认识  15
  1.4 创伤愈合神经修复的中医学研究进展与应用  15-17
    1.4.1 单味中药促创伤愈合神经修复的现代临床报道  15-16
    1.4.2 复方中药促创伤愈合神经修复的现代临床报道  16-17
  1.5 中药提取物选择依据  17-18
  1.6 研究目的与意义  18-19
2 材料与方法  19-25
  2.1 实验材料  19-20
    2.1.1 细胞  19
    2.1.2 主要仪器  19
    2.1.3 主要试剂  19-20
  2.2 实验方法  20-25
    2.2.1 雪旺细胞的传代培养和保存  20-21
    2.2.2 中药提取物对雪旺细胞的药物毒性的影响  21-22
    2.2.3 中药提取物对雪旺细胞增殖的影响  22
    2.2.4 中药提取物对雪旺细胞细胞周期的影响  22
    2.2.5 中药提取物对雪旺细胞 BDNF、NCAM 和 PCNA 表达的影响  22-23
    2.2.6 中药提取物对雪旺细胞表达 BDNF 基因的影响  23-24
    2.2.7 统计方法  24-25
3 结果与分析  25-41
  3.1 中药成分对雪旺细胞的细胞毒作用  25-26
    3.1.1 乳香提取物对雪旺细胞的细胞毒作用  25
    3.1.2 党参提取物对雪旺细胞的细胞毒作用  25-26
    3.1.3 当归提取物对雪旺细胞的细胞毒作用  26
  3.2 中药成分对雪旺细胞增殖作用的影响  26-28
    3.2.1 乳香提取物对雪旺细胞增殖的影响  26-27
    3.2.2 党参提取物对雪旺细胞增殖的影响  27
    3.2.3 当归提取物对雪旺细胞增殖的影响  27-28
  3.3 中药提取物对雪旺细胞细胞周期的时间效应  28-35
    3.3.1 乳香提取物对细胞周期的影响  28-30
    3.3.2 党参提取物对细胞周期的影响  30-32
    3.3.3 当归提取物对细胞周期的影响  32-35
  3.4 中药提取物对雪旺细胞 BDNF、NCAM 和 PCNA 表达的影响  35-36
    3.4.1 乳香提取物对雪旺细胞 BDNF、NCAM 和 PCNA 表达的影响  35
    3.4.2 党参提取物对雪旺细胞 BDNF、NCAM 和 PCNA 表达的影响  35
    3.4.3 当归提取物对雪旺细胞 BDNF、NCAM 和 PCNA 表达的影响  35-36
  3.5 实时荧光定量 RT-PCR 检测中药提取物对雪旺细胞 BDNF mRNA 基因表达的影响  36-41
    3.5.1 总 RNA 提取结果  36
    3.5.2 不同浓度中药提取物对雪旺细胞 BDNF mRNA 表达量的影响  36-41
4 讨论  41-43
  4.1 中药提取物对雪旺细胞增殖和细胞周期的影响  41
  4.2 中药提取物对雪旺细胞蛋白表达的研究  41-43
5 结论  43-44
致谢  44-45
参考文献  45-50
攻读硕士学位期间发表的学术论文  50

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