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中国野生宽皮柑橘酚类物质的检测及其抗氧化活性研究

作　者: 张元梅
导　师: 周志钦; 叶兴乾
学　校: 西南大学
专　业: 果树学
关键词: 野生宽皮柑橘 酚类物质 类黄酮 酚酸 抗氧化
分类号: S666
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要


中国是柑橘属植物的重要起源地之一,具有丰富的野生柑橘资源。酚类物质是柑橘果实中一类次生代谢产物,有着重要的生理功能,是目前国内外研究的热点内容之一。本文较系统地研究了我国野生宽皮柑橘果实中主要类黄酮、酚酸等酚类物质的组成与分布,并对其抗氧化活性进行评价,而且将所得结果与我国广泛栽培的两个宽皮柑橘品种(大津4号温州蜜柑和岩溪晚芦桠柑)进行比较,旨在为我国野生柑橘资源的充分利用提供数据支持,也为柑橘果品营养、医药和保健价值的开发研究提供一定的理论基础和实践价值。主要研究结果如下：(1)建立了同时检测柑橘果实中18种黄酮类化合物(圣草次苷、二氢槲皮素、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、野漆苷、槲皮苷、圣草素、香峰草苷、枸橘苷、柚皮素、木犀草素、山奈酚、香叶木素、橙黄酮、川陈皮素、橘皮素)的高效液相色谱法,18种类黄酮在42min内能够完全分离。具体技术参数如下：色谱柱：ZORABX SB-C18(4.6mm×250mm,5μm)；流动相：0.1%甲酸水溶液(A),甲醇(B)；梯度洗脱程序：0—20min37%—50%B;20—35min50%—80%B;35—40min80%—100%B;40—50min100%B;50—60min37%B,流速0.7mL/min;柱温：25℃；各类黄酮的线性范围在0.52—960.00μg/mL (r=0.9996—1.0000),定量限为0.05—0.133μg/mL,回收率介于88.70%—104.76%,相对标准偏差为0.33%—3.05%(n=6)。结果表明该方法是一种检测分析柑橘类黄酮组成与含量的简便、快速和准确的方法。(2)选择了14个野生宽皮柑橘基因型和2个宽皮柑橘栽培品种,分别采用福林酚法、硝酸钠-硝酸铝比色法和高效液相色谱法测定了其果皮和果肉中总酚、总黄酮、类黄酮和酚酸的组成与含量。结果表明：各基因型果实果皮中总酚、总黄酮、类黄酮和酚酸的含量都显著高于果肉；不同基因型间的酚类物质组成与含量差异明显。在14个野生基因型中,聂都野橘果实果皮、果肉中总酚含量最高,分别为51.14±0.26mg/g DW和22.26±0.64mg/g DW;橙皮苷是最主要的类黄酮,广西红皮酸橘果实果皮、果肉橙皮苷含量最丰富,分别为55.98±1.23mg/g DW和22.13±0.33mg/g DW;阿魏酸是主要的酚酸,在可溶性酚酸中,聂都野橘果实果皮和果肉阿魏酸的含量最高,而在结合性酚酸中,广西红皮酸橘果实果皮和果肉的含量最高。(3)采用DPPH、FRAP、ABTS和ORAC四种体外抗氧化方法评价了14个野生宽皮柑橘基因型和2个宽皮柑橘栽培品种果实的抗氧化活性。结果显示果皮抗氧化活性显著高于果肉,14个野生基因型均表现出较强的抗氧化活性。综合抗氧化能力指数表明,聂都野橘、粗皮狗屎柑、大坑野橘、道县野橘、广西红皮酸橘、半野生橘子No.2和细皮狗屎柑果皮抗氧化活性显著高于两个栽培品种,而聂都野橘、淅川皱皮柑和广西红皮酸橘果肉抗氧化活性高于两个栽培品种。(4)分析了柑橘果实总酚、总黄酮与DPPH、FRAP、ABTS和ORAC四种抗氧化方法之间的相关性,发现果皮中总酚与四种抗氧化方法的相关性显著(p<0.05),果肉中总酚与DPPH、FRAP和ABTS的相关性显著(p<0.05)；总黄酮与四种抗氧化方法之间相关性不显著(p>0.05)。这表明总酚可能是抗氧化活性的主要贡献者之一。

全文目录


目录  3-5
摘要  5-7
Abstract  7-10
第1章 文献综述  10-20
  1.1 中国柑橘资源概况  10
  1.2 柑橘果实酚类物质的研究进展  10-14
    1.2.1 柑橘果实酚类物质的种类、含量与分布  10-12
    1.2.2 柑橘果实酚类物质的生理功能  12-14
  1.3 酚类物质检测技术  14-16
    1.3.1 光谱分析法  14-15
    1.3.2 薄层层析法  15
    1.3.3 高效液相色谱法  15-16
    1.3.4 高效毛细管电泳法  16
    1.3.5 色谱-质谱联用  16
  1.4 体外抗氧化活性分析  16-20
    1.4.1 DPPH自由基清除实验  17
    1.4.2 FRAP铁离子还原实验  17
    1.4.3 ABTS自由基抗氧化实验  17-18
    1.4.4 ORAC氧化自由基吸收能力实验  18-20
第2章 引言  20-22
  2.1 论文研究的目的和意义  20-21
  2.2 论文研究的技术路线  21-22
第3章 材料与方法  22-28
  3.1 植物材料  22
  3.2 主要试剂和仪器设备  22-23
    3.2.1 实验试剂  22-23
    3.2.2 实验仪器  23
  3.3 实验方法  23-27
    3.3.1 酚类物质的提取  23-24
    3.3.2 总酚的测定  24
    3.3.3 总黄酮的测定  24
    3.3.4 类黄酮高效液相色谱测定方法的建立  24-25
    3.3.5 类黄酮高效液相色谱测定方法的评价  25-26
    3.3.6 酚酸的测定  26
    3.3.7 DPPH自由基清除实验  26
    3.3.8 FRAP铁离子还原实验  26-27
    3.3.9 ABTS自由基抗氧化实验  27
    3.3.10 ORAC氧化自由基吸收能力实验  27
  3.4 数据分析  27-28
第4章 结果与分析  28-54
  4.1 柑橘果实中类黄酮HPLC分析方法的建立及方法学验证  28-33
    4.1.1 HPLC分析方法的建立  28-30
    4.1.2 HPLC定量分析的方法学考察  30-33
  4.2 柑橘果实酚类物质的组分与含量差异  33-48
    4.2.1 不同柑橘基因型果皮中酚类物质的组分与含量差异  33-42
    4.2.2 不同柑橘基因型果肉中酚类物质的组分与含量差异  42-48
  4.3 柑橘果实抗氧化活性比较  48-50
    4.3.1 不同柑橘基因型果皮中抗氧化活性比较  48-49
    4.3.2 不同柑橘基因型果肉中抗氧化活性比较  49-50
  4.4 酚类物质与抗氧化能力的相关性  50-54
    4.4.1 不同柑橘基因型果皮酚类物质的含量与抗氧化能力的相关性  50-51
    4.4.2 不同柑橘基因型果肉酚类物质的含量与抗氧化能力的相关性  51-54
第5章 讨论  54-58
  5.1 类黄酮高效液相色谱测定方法  54
  5.2 中国野生宽皮柑橘酚类物质的含量与分布  54-56
    5.2.1 中国野生宽皮柑橘酚类物质的含量  54-55
    5.2.2 中国野生宽皮柑橘酚类物质的分布  55-56
  5.3 中国野生宽皮柑橘抗氧化能力的差异  56-57
    5.3.1 抗氧化方法的选择  56
    5.3.2 中国野生宽皮柑橘抗氧化能力的差异  56-57
  5.4 中国野生宽皮柑橘酚类物质与抗氧化能力的相关性  57-58
第6章 结论  58-60
参考文献  60-68
附录  68-70
致谢  70-72
发表论文和参研课题  72

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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 果树园艺 > 柑桔类
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