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Neuritin对Neuralized介导的Notch信号途径配体JAG1泛素化的影响

作　者: 钟晨
导　师: 黄瑾；杨磊；谢建新
学　校: 石河子大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: Neuritin JAG1 Neuralized 表达水平内吞泛素化
分类号: Q50
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：观察鉴定Neuritin对Neuralized蛋白表达水平以及对Neuralized介导的Notch信号途径配体JAG1蛋白表达水平、内吞及泛素化的影响,明确Neuritin与Neuralized介导的Notch信号通路的关系,探讨Neuritin在神经系统中的作用机制。方法：采用脂质体法将pIRES-HA-JAGl质粒,pcDNA3.1-flag-neuralized质粒,pcDN A3.1-his-neuritin质粒,pcDN A3.1-H A-ubiquitin质粒以及PBS/U6-neuritin siRNA质粒,分组转染至HEK293细胞。运用Western-Blot技术检测Neuritin过表达对Neuralized介导的Notch信号途径配体JAG1蛋白表达水平以及Neuralized蛋白表达水平的影响；之后运用直接免疫荧光技术观察Neuritin过表达对Neuralized介导的Notch配体蛋白JAG1内吞的影响；为进一步验证Neuritin对Neuralized介导的Notch信号途径配体JAG1蛋白的影响,本实验采用siRNA技术检测Neuritin表达降低对Neuralized介导的Notch信号途径配体JAG1蛋白表达水平以及观察Neuritin表达降低对Neuralized介导的Notch配体蛋白JAG1内吞的影响。最后,运用Ubiquitination assay技术检测Neuritin对Notch配体JAG1蛋白泛素化的影响。结果：1.通过PCR技术以及基因测序技术鉴定实验所需质粒的完整性和正确性；2.通过Western-Blot分析Neuritin对Neuralized及其介导的Notch途径配体JAG1表达水平的影响：(1) Neuritin过表达能够使得JAG1蛋白的表达增高,能够降低Neuralized蛋白的表达水平；(2) Neuritin表达降低能够使得JAG1蛋白的表达下调,能够增加Neuralized蛋白的表达水平；3.通过直接免疫荧光技术观察JAG1的细胞定位来评价Neuritin对Neuralized介导的Notch途径配体JAG1内吞的影响：(1) Neuritin过表达能够部分抑制Notch信号途径配体JAG1蛋白内吞；(2) Neuritin表达降低能够促进Notch信号途径配体JAG1蛋白的内吞；4.Ubiquitination assay技术观察对Notch信号途径配体JAG1泛素化的影响；Neuritin能够抑制Neuralized蛋白介导的JAG1蛋白的泛素化。结论：1.Neuritin能够能够逆转JAG1蛋白的表达下调,降低Neuralized蛋白的表达；2.Neuritin能够部分抑制Notch信号途径配体JAG1蛋白内吞；3.Neuritin蛋白能够抑制JAG1蛋白的泛素化。

全文目录

中文摘要  6-7
英文摘要  7-8
英文缩略语表  8-9
前言  9-11
技术路线  11-12
材料  12-19
  1 细胞株  12
  2 菌株与质粒  12
  3 主要试剂  12-13
  4 主要试剂配制  13-18
  5 主要仪器设备  18-19
方法  19-28
  1 质粒抽提与鉴定  19-21
  2 细胞培养  21-22
  3 Western-Blot  22-24
  4 免疫荧光检测  24-26
  5 Ubiquitination Assay  26-28
结果  28-40
  1 Neuritin蛋白对Neuralized蛋白介导的Notch信号途径配体JAG1 表达水平的影响  28-36
  2 Neuritin蛋白对Neuralized蛋白介导的Notch信号途径配体JAG1内吞的影响  36-38
  3 Neuritin蛋白对Neuralized蛋白介导的Notch信号途径配体JAG1泛素化的影响  38-40
讨论  40-44
结论  44-45
参考文献  45-48
文献综述  48-54
  参考文献  51-54
作者简介  54-55
致谢  55-56
导师评阅表  56

Neuritin对Neuralized介导的Notch信号途径配体JAG1泛素化的影响

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