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湖南灰毡毛忍冬皂苷提取及纯化工艺的研究

作　者: 黄佳
导　师: 饶力群
学　校: 湖南农业大学
专　业: 生化与分子生物学
关键词: 灰毡毛忍冬灰毡毛忍冬皂苷乙川续断皂苷乙单因素实验正交实验提取纯化
分类号: TQ914
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

灰毡毛忍冬L. macranthoides Hand.-Mazz.俗称大金银花,为被子植物门、双子叶纲、合瓣花亚纲、川续断目、忍冬科、忍冬属植物,主要分布于安徽、江西、湖北、湖南、广东、广西、四川及贵州等省。灰毡毛忍冬是我省人工栽培的大宗药材之一,也是我省栽培忍冬的主流品种,广泛栽种于隆回、溆浦、新邵、洞口、新宁、临武、安化、耒阳、桂阳等地,占我省忍冬的90%以上。其中溆浦、隆回两县的产量最高,且成为全省中药材规范化种植基地县。2001年隆回被国家林业部授与“中国金银花之乡”的称号,小沙江镇更是成为全国最大的金银花集散中心。灰毡毛忍冬的干燥花蕾或带初开的花(药典称为山银花,民间也称金银花)具有清热解毒、抑菌消炎、抗氧化等功效,广泛用于医药、饮料、日用生活用品中。本论文主要对灰毡毛忍冬中的灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙的提取工艺、含量测定及差异、纯化工艺三个方面进行了研究,结果如下：1.比较了温浸法、超声法和热回流法3种提取方法。结果表明：热回流法、超声提取法明显优于温浸法,而热回流法又略优于超声提取法。由于热回流法较温和,且灰毡毛忍冬皂苷乙降解的程度较小,易大规模生产,故试验采取热回流法。2.对比了水、甲醇、乙醇、乙酸乙酯4种溶剂对这2种皂苷的提取效果的影响。结果表明：这2种皂苷极性较大,易溶于甲醇、乙醇等醇中,难溶于极性较小的乙酸乙酯溶剂中。考虑到甲醇有毒,因此选用乙醇作为提取剂。3.摸索了乙醇热回流法对这2种皂苷提取效果的影响。通过单因素试验建立提取工艺,在此基础上进行四因素三水平正交试验。优化的最佳提取工艺参数为：提取温度80℃、提取时间为120min、液料比为1：10、乙醇浓度90%。在优化条件下进行验证实验,其总含量达到7.18%。表明湖南灰毡毛忍冬中这2种皂苷的总含量远大于2010年版《药典》规定的山银花中灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙的总含量不得少于5.0%。4.建立了灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙的HPLC测定方法。色谱条件为：色谱柱Hypersil ODS(4.6mm×250mm,5μ),检测波长210nm,柱温40℃,流速0.5mL/min,以乙腈和0.4%冰乙酸进行梯度洗脱。在此色谱条件下峰型完整,两种皂苷的分离度好,表明HPLC法检测方法可靠、可行。5.分析了灰毡毛忍冬的不同炮制方法、不同药用部位及不同品种中灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙的总含量。结果表明,湖南灰毡毛忍冬不同品种中这两种皂苷含量均在7.0%,差别不大；晒干法、烘干法及真空冷冻干燥法相较,晒干法对这两种皂苷含量的影响较大,只有6.5%；忍冬藤中这两种皂苷的含量为1%左右,远远少于其花蕾中的含量。6.研究了SA-1型药用皂苷类吸附树脂对这两种皂苷的纯化工艺。试验考察了上样浓度、pH值、流速对吸附率以及洗脱浓度、流速对解吸率的影响。结果表明：流速为2BV/h,浓度在2.5mg/mL左右,pH=6.8的上样条件及流速为2BV/h的60%乙醇溶液作为洗脱条件,灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙的纯度可达到65.6%。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-13
第一章文献综述  13-33
  1 忍冬概述  13-14
  2 忍冬的药用品种与道地性  14-17
    2.1 金银花  14-15
    2.2 山银花  15
    2.3 地方习用品种  15-17
  3 金银花的采收时间与加工方法  17-18
    3.1 采收时间  17
    3.2 加工方法  17-18
  4 金银花的主要化学成分  18-25
    4.1 挥发油  18-19
    4.2 黄酮类  19
    4.3 有机酸类  19-20
    4.4 三萜皂苷类  20-24
      4.4.1 结构与分类  20-22
      4.4.2 忍冬中已发现的三萜皂苷  22-24
    4.5 神经酰胺类  24-25
    4.6 其他成分  25
  5 三萜皂苷提取和纯化工艺研究进展  25-27
    5.1 三萜皂苷的理化性质  25-26
    5.2 三萜皂苷的提取方法  26-27
    5.3 三萜皂苷的纯化方法  27
  6 三萜及其苷类的生物活性  27-33
    6.1 抗肿瘤活性  27-28
    6.2 抗病毒活性  28
    6.3 抗炎活性  28-29
    6.4 抗菌作用  29
    6.5 抗糖尿病作用  29-30
    6.6 护肝效应  30
    6.7 抗氧化作用  30-31
    6.8 对免疫系统的作用  31
    6.9 其他生物活性  31-33
      6.9.1 对消化系统的作用  31
      6.9.2 抗溃疡  31
      6.9.3 解毒作用  31-32
      6.9.4 抗疟、抗蠕虫活性  32-33
第二章灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙提取工艺研究  33-49
  1 前言  33
  2 材料与方法  33-38
    2.1 试验材料  33
    2.2 试验试剂  33-34
    2.3 试验仪器  34
    2.4 试验方法  34-38
      2.4.1 HPLC法测定总含量的方法  34-36
      2.4.2 提取方法的选择  36-37
      2.4.3 热回流提取工艺参数的单因素试验  37-38
      2.4.4 正交实验  38
      2.4.5 总含量计算方法  38
  3 结果与分析  38-47
    3.1 HPLC检测波长  38-40
    3.2 HPLC洗脱分离效果  40-41
    3.3 灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙的定量分析  41-42
      3.3.1 对照品的HPLC图谱  41-42
      3.3.2 供试品含量分析  42
    3.4 精密度试验  42
    3.5 稳定性试验  42-43
    3.6 重现性试验  43
    3.7 加标回收试验结果  43
    3.8 提取方法的选择  43-44
    3.9 热回流法单因素试验  44-46
      3.9.1 乙醇浓度对总得率的影响  44
      3.9.2 料液比对总得率的影响  44-45
      3.9.3 提取温度对总得率的影响  45
      3.9.4 提取时间对总得率的影响  45-46
    3.10 正交试验结果  46-47
    3.11 验证试验  47
  4 讨论  47-49
第三章不同品种及加工方法下灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙的含量  49-56
  1 前言  49
  2 材料与方法  49-50
    2.1 实验材料  49
    2.2 试验试剂  49
    2.3 试验仪器  49-50
    2.4 试验方法  50
      2.4.1 材料干燥及预处理  50
      2.4.2 HPLC法测定总含量  50
  3 结果与分析  50-54
    3.1 冷冻干燥法  50-51
    3.2 烘干法  51
    3.3 硫熏晒干法  51-52
    3.4 忍冬藤  52-53
    3.5 灰毡毛忍冬两个品种间的差异  53-54
  4 讨论  54-56
第四章灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙的大孔树脂纯化工艺研究  56-63
  1 前言  56
  2 材料与方法  56-59
    2.1 试验材料  56
    2.2 试验试剂  56
    2.3 试验仪器  56-57
    2.4 试验方法  57-59
      2.4.1 树脂的预处理  57
      2.4.2 供试品溶液的制备  57
      2.4.3 含量测定的方法  57
      2.4.4 吸附量的测定  57-58
      2.4.5 解吸率的测定  58
      2.4.6 pH值对吸附量的影响  58
      2.4.7 上样流速对吸附量的影响  58
      2.4.8 原液浓度对吸附量的影响  58-59
      2.4.9 洗脱流速对解吸率的影响  59
      2.4.10 洗脱浓度对解吸率的影响  59
  3 结果与分析  59-62
    3.1 pH值对吸附率的影响  59-60
    3.2 原液浓度对吸附率的影响  60
    3.3 上样流速对吸附率的影响  60-61
    3.4 洗脱剂浓度对解吸率的影响  61
    3.5 洗脱剂流速对解吸率的影响  61-62
    3.6 皂苷纯度定性分析  62
    3.7 皂苷纯度定量分析  62
  4 讨论  62-63
第五章结论与展望  63-66
  1 结论  63
  2 展望  63-66
参考文献  66-72
致谢  72-73
作者简历  73
在读期间发表的论文  73-74
附图  74

湖南灰毡毛忍冬皂苷提取及纯化工艺的研究

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