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嗜肺军团菌DNA疫苗的初步研究

作　者: 刘明杰
导　师: 陈建平
学　校: 四川大学
专　业: 病原生物学
关键词: 嗜肺军团菌 DNA疫苗 lvgA基因 htpA基因 Hsp60基因 CpG基序重组PCR 壳聚糖
分类号: R392
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

军团病(Legionnaire’s disease)是由于吸入含有致病性军团菌感染所致的一种以非典型肺炎或Pantiac热为主要表现常伴多系统损害的急性细菌性传染病，病程进展快，免疫功能低下者易感，由于其症状不典型，常被误诊误治，病死率高，易暴发流行。军团菌广泛存在于土壤、江河湖等天然水、井水和自来水生活用水、现代城市广泛使用的空调的冷却塔水、加湿器内水及其它人工水环境在内各种水体环境中，是一种革兰氏阴性兼性菌，可寄生于原虫中，作为一种病原体，它可侵入哺乳动物巨噬细胞，逃避吞噬体和溶酶体的杀伤作用，并在其中生长繁殖。军团菌目前已发现有48种70个血清型，致病性军团菌主要包括嗜肺军团菌(Legionella pneumophila)血清1～15型、L．micdadei、L．gormanii、L．bozemanii等，其中嗜肺军团菌占96.4％；在美国，90％的军团病由嗜肺军团菌引起，而其中79％为血清1型(LP1)。我国及其它许多国家已将军团病列为需要重点防治的一种新发传染病，但目前尚无理想的防治措施，因此，研制出安全有效的疫苗对军团病防治具有重要的现实意义。本研究在查阅分析国内外相关文献及结合本室研究进展的基础上，选定嗜肺军团菌DNA疫苗作为研究方向，具体选择了lvgA基因、htpA和Hsp60基因为疫苗候选基因，并将免疫刺激序列CpG基序构建于lvgA基因侧翼，以及采用重组PCR法实现了嗜肺军团菌lvgA及Hsp60基因融合，构建了lvgA基因、引入CpG基序的lvgA基因及lvgA／Hsp60融合基因的重组真核表达载体等疫苗，并检测其免疫原性和免疫保护性指标，为最终研制出新一代安全、高效嗜肺军团菌DNA疫苗提供了一定的实验依据。

全文目录

中文摘要  5-8
英文摘要  8-12
前言  12-16
第一部分嗜肺军团菌lvgA基因原核表达质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达  16-31
  引言  16
  材料和方法  16-22
  结果  22-24
  附图  24-28
  讨论  28-30
  小结  30-31
第二部分嗜肺军团菌htpA基因的克隆及其原核表达  31-40
  引言  31
  材料和方法  31-33
  结果  33-35
  附图  35-38
  讨论  38-39
  小结  39-40
第三部分 PCR介导嗜肺军团菌lvgA和Hsp60基因融合及原核表达质粒的构建与表达  40-55
  引言  40
  材料和方法  40-44
  结果  44-46
  附图  46-51
  讨论  51-54
  小结  54-55
第四部分嗜肺军团菌lvgA基因、引入CpG基序的lvgA基因和lvgA／Hsp60融合基因真核表达质粒的构建及其在NIH3T3细胞中的表达  55-74
  引言  55
  材料与方法  55-62
  结果  62-64
  附图  64-70
  讨论  70-73
  小结  73-74
第五部分嗜肺军团菌lvgA基因、引入CpG基序的lvgA基因和lvgA／Hsp60融合基因DNA疫苗在小鼠体内的免疫原性初步研究  74-92
  引言  74
  材料与方法  74-79
  结果  79-85
  附图  85-87
  讨论  87-91
  小结  91-92
第六部分嗜肺军团菌lvgA基因、引入CpG基序的lvgA基因和lvgA／Hsp60融合基因DNA疫苗在小鼠体内免疫保护性的初步研究  92-103
  引言  92
  材料与方法  92-95
  结果  95-97
  附图  97-101
  讨论  101-102
  小结  102-103
全文总结  103-106
参考文献  106-112
综述  112-136
个人简历  136-138
致谢  138-139

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
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