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乙型肝炎病毒HBsAg DNA疫苗的实验研究

作　者: 王海燕
导　师: 张学庸
学　校: 第四军医大学
专　业: 内科学
关键词: PCR HBsAg 真核表达载体 DNA疫苗转梁 G418 ELISA 免疫荧光染色原位杂交免疫细胞化学染色点杂交 Western-blotting 免疫学抗体 ELASA IL-2 CD4 CD8 CD45R 流式细胞仪细胞毒性T细胞台盼兰染色免疫学HBsAg 移植瘤 CD45 HE染色免疫组化
分类号: R392
类　型: 博士论文
年　份: 2000年
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内容摘要

乙型病毒性肝炎在我国流行非常广泛，造成极大的社会危害。由于迄今尚缺乏有效的治疗措施，因此预防显得十分重要。我国经过十余年大规模的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)疫苗接种，在人群中产生了良好的保护性免疫，尤其是新生儿和婴幼儿普种疫苗，使疾病的发病率开始明显降低。因此，HBsAg疫苗预防接种是乙型肝炎得到根本控制的最有效、最经济的措施。经过无数人几十年的不懈努力，HBsAg疫苗经过血源性灭活疫苗到基因工程重组疫苗两个阶段的发展，已经可以大规模批量生产。目前使用的酵母工程疫苗具有免疫原性好，质量稳定，副作用小，成本低众多优点，在人群中使用可以达到90％的保护率。现有疫苗的免疫预防作用虽然得到多方面的肯定，但也存在某些不足，例如：约10％的人不能产生保护性抗体；有些人对疫苗蛋白过敏；免疫疗程长，抗体产生迟缓；只能刺激机体产生保护性抗体，用于预防，而不能诱导机体的细胞免疫，用于治疗。新型疫苗尤其是可以用于治疗的疫苗是目前的研究热点，其中DNA疫苗以其简单而独特的免疫方式和良好的动物免疫效果而倍受关注，更为疫苗研究打开了新思路。 DNA免疫是于八十年代末发现，九十年代初发展起来的新型免疫方法。DNA疫苗与传统疫苗之间最大的区别，也即最大的优点和特点是它能诱导出其表达的外源蛋白的特异性CTL，这正是治疗疾病的关键。因此，DNA疫苗可以作为治疗性疫苗的重要备选。 HBV基因组S-开放读框(ORF)编码病毒外膜抗原的3种蛋白，其中s基因携带主要的免疫识别表位是各亚型共同抗原决定簇，能刺激机体产生保护性抗体，是基因工程疫苗的主要成分。研究发明前S1和前S2蛋白与s蛋白诱导的免疫应答各自受宿主免疫应答遗传基因(MHC)的不同位点控制，相互间独立存在。前S1和前S2蛋白诱导的特异性Th细胞不仅辅助特异性抗自身抗体产生，还能诱导产生针对同型s蛋白的特异性抗体，对s蛋白的免疫应答具有协同效应。我们选用S-ORF基因作为

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常用英文缩略词  3-5
前言  5-6
第—部分 HBV表面抗原基因真核表达载体的构建及鉴定  6-27
  摘要  6-8
  材料  8-13
  方法  13-19
  结果  19-22
  讨论  22-27
第二部分重组质粒的转染、蛋白表达及稳定转染细胞系的初步建立  27-49
  摘要  27-29
  材料  29-31
  方法  31-35
  结果  35-43
  讨论  43-49
第三部分 HBsAg DNA疫苗诱导BALB／c小鼠体液免疫及细胞免疫的初步探讨  49-68
  摘要  49-51
  材料  51-52
  方法  52-54
  结果  54-61
  讨论  61-68
第四部分 HBsAg DNA疫苗免疫小鼠的抗原刺激实验  68-80
  摘要  68-70
  材料  70
  方法  70-71
  结果  71-76
  讨论  76-80
总结  80-81
致谢  81-82
文献回顾  82-95
附图  95-103

乙型肝炎病毒HBsAg DNA疫苗的实验研究

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