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监测人TCRαβT细胞CDR3谱系漂移、TCR基因重排方法的建立和初步应用

作　者: 姚新生
导　师: 王小宁
学　校: 第一军医大学
专　业: 分子免疫学
关键词: 双特异性抗体(BsAb) 基因扫描(GeneScan) 免疫扫描谱型分析 T细胞抗原受体(TCR) 互补决定区3(CDR3) 癌胚抗原(CEA) 外周血淋巴细胞(PBL) 连接介导PCR(LM-PCR) TCR基因重排 重组激活基因酶(RAG) 重组信号末端序列(RSS) 个性化治疗 受体编辑/修正 免疫排斥 移植 细胞因子 非同源末端重组系统(NHEJ) 慢性乙型病毒型肝炎(CHB) 急性T淋巴细胞白血病(T-ALL) 末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)
分类号: R392
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


背景：近年来，病毒感染、肿瘤、自身免疫病、移植等病理状态下T细胞的应答与耐受取得较大发展，对这些疾病状态下特异T细胞产生机制、监测方法、在个性化治疗中的应用、相应抗原表位疫苗的开发研究有着重大理论和潜在临床应用价值。目前，“ELISpot技术”、“FCM检测细胞内细胞因子”、“四聚体技术”等可检测密切相关(已知抗原)特异T细胞的功能和频数，但是不能提供特异T细胞的分子特征和整个样本中T细胞的组成信息。因每个T细胞有着自己独特的TCR CDR3分子，不同T细胞克隆具有不同序列的CDR3基因组成(不同长度)，从而形成多样性的CDR3基因谱型，CDR3区的序列决定其结构，从而决定TCR的特异性，或者说，CDR3相当于T细胞的“指纹”，监测CDR3序列的多态性和长度分布以及不同病理状态下的频率变化(谱系漂移)，可以反映特定T细胞克隆扩增的程度，从而反映T细胞功能状态。经典的克隆选择理论认为这些特异T细胞来源于T细胞受体库中已有的T细胞“优势增生”，但随着外周B细胞BCR“二次重排”的研究进展，已证实外周T细胞同样存在TCR的“二次重排(编辑／修正)，即T细胞能以一种部分或全新的V(D)J重排的新受体取代原有的受体，从而能清除自身反应性细胞，或者是改变针对自身抗原的反应性，亦或更好的作用于微生物。对不同病理状态下特异T细胞TCR分子特征的鉴定和动态变化监测，探讨其和TCR“二次重排”的相关性，建立相应的研究技术和模型受到广泛的关注。 目的 (1)建立监测人TCR αβ T细胞CDR3谱系漂移的免疫扫描谱型分析技术(immunoscope spectratyping technique)，分析正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)中TCR αβ T细胞CDR3谱系的多态性和长度分布；监测活动性慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B，CHB)、急性T淋巴细胞白血病(T-lineage acute lymphoblastic leukemia，T-ALL)、外周造血干细胞(peripheral blood stem cells，PBSC)移植前后患者PBMC中TCR αβ T细胞CDR3谱系漂移情况，并鉴定T细胞株Jurkat的TCR分子特征。为感染、肿瘤、移植等疾病的细胞免疫应答机制、诊断、治疗研究提供新的思路与方法；为TCR二次重排(second rearrangement)研究提供监测TCR动态变化的技术； (2)建立监测人TCR αβ T细胞TCR基因重排的连接介导PCR方法(Ligation-

全文目录


中文摘要  3-8
ABSTRACT  8-14
前言  14-18
第一章 监测人TCR αβ T细胞CDR3谱系漂移的免疫扫描谱型分析技术的建立与初步应用  18-105
  第一节 监测人TCR αβ T细胞CDR3谱系飘移的免疫扫描谱型分析技术的建立  19-35
  第二节 慢性活动性乙型肝炎患者外周血TCR αβ T细胞CDR3谱系的初步分析  35-50
  第三节 急性T淋巴细胞白血病患者外周血TCR αβ T细胞CDR3谱系的初步分析  50-63
  第四节 免疫扫描谱型分析技术对单／寡／多克隆样本中TCR αβ T细胞CDR3谱系的动态监测  63-78
  第一章附表 附图  78-104
    第一节附表  78-82
    第一节附图  82-92
    第二节附图  92-94
    第三节附图  94-98
    第四节附图  98-104
  第一章小结  104-105
第二章 监测人TCR αβ T细胞TCR基因重排方法的建立初步应用  105-134
  第一节 监测人TCR αβ T细胞TCR BD基因重排时RSS断裂末端的LM-PCR方法的建立  105-115
  第二节 TCR基因重排调节蛋白(非同源末端重组系统蛋白)mRNA表达的监测和应用  115-124
  第二章第一节附图  124-128
  第二章第二节附图  128-133
  第二章小结  133-134
第三章 抗CD3×抗CEA BsAb体外介导T细胞活化抗肿瘤时CDR3谱系漂移和机制的初步探讨  134-156
  第一节 抗CD3×抗CEA BsAb和效、靶细胞的结合及介导PBL的杀肿瘤效应  134-146
  第二节 抗人CD3×抗CEA BsAb介导PBL抗肿瘤时TCR β链CDR3谱系变化探讨  146-155
  第三章小结  155-156
第四章 文献综述  156-184
  综述一 人TCR αβ T细胞TCR β链CDR3谱型与疾病研究概况及进展  156-163
  综述二 外周T细胞TCR二次重排(编辑／修正)与选择  163-175
  综述三 抗CD3×抗肿瘤抗原双特异性抗体介导T淋巴细胞抗肿瘤效应与机制研究进展  175-184
全文总结  184-185
英文缩略词表  185-188
成果  188-190
致谢  190-191
附：原创性说明及版权使用授权说明  191

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
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