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性传播疾病病原体检测基因芯片研究

作　者: 石岗
导　师: 王升启
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 药物分析学
关键词: 基因芯片淋球菌沙眼衣原体解脲脲原体
分类号: R759
类　型: 博士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

本课题将基因芯片技术用于性传播疾病病原体诊断与检测研究，制备了以荧光标记多重不对称PCR技术为基础的性传播疾病病原体寡核苷酸检测芯片，实现了淋球菌、沙眼衣原体和解脲脲原体三种病原体的同时多样本检测。通过芯片制备工艺条件研究确定制备性传播疾病病原体检测芯片的最佳方案是采用长度40mer，3’端双功能修饰的寡核苷酸探针点制到醛基片上制备芯片。在此基础上，设计并合成了三种病原体以及荧光素酶基因和大豆基因特异的引物和探针序列。以此引物和探针对性病检测芯片优化结果显示：选取点样液A和杂交液B，探针序列靠近荧光标记引物端，探针浓度以50μM，杂交温度以42℃，杂交时间以60min，PCR产物经加热变性后与杂交液以1：2比例制备检测芯片为宜。对该芯片的检测灵敏度进行条件优化表明：在25μl PCR反应体系中，淋球菌、沙眼衣原体和解脲脲原体和荧光素酶基因正向引物浓度分别为0． 225μM、0． 135μM、0． 15μM和0． 3μM，反向Cy3标记的荧光标记引物浓度分别为2． 25μM、1． 35μM、1． 5μM和3μM，dNTP为300μM，MgCl2 3mM，KCl 75mM，1×PCR缓冲液和2U Taq酶。PCR扩增条件为：预变性(5 min／94℃)；35个循环：变性(30 sec／94℃)，退火(30sec／57℃)，延伸(30 sec／72℃)；延伸：(5 min／72℃)。以此条件进行多重PCR扩增，芯片检测的灵敏度最高，四个基因皆为5×103copies。特异性实验表明芯片对待检病原体特异。对60份临床标本进行淋球菌、沙眼衣原体和解脲脲原体检测，芯片检测方法与临床PCR诊断方法的符合率分别为97． 2％、100％和75． 2％。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-6
引言  6-11
一、寡核苷酸芯片制备工艺条件的确定  11-25
二、性传播疾病病原体寡核苷酸检测芯片的制备  25-47
三、荧光标记多重不对称PCR的灵敏度优化  47-72
四、性传播疾病病原体检测芯片的性能评价  72-78
结论  78-81
参考文献  81-87
致谢  87-88
发表文章  88-99
  研究论文性传播疾病病原体检测芯片的制备  88-99
文献综述性传播疾病病原体检测方法的研究现状  99-104
文献综述基因芯片及其在性传播疾病病原体研究中的应用  104-107

性传播疾病病原体检测基因芯片研究

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