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内皮素-1基因表达与应激性溃疡关系的实验研究

作　者: 段义民
导　师: 李兆申；许国铭；屠振兴
学　校: 第二军医大学
专　业: 内科学
关键词: 冷束缚,应激胃粘膜急性损伤血流量胃微循环,内皮素放免测定免疫组化基因表达核酸杂交,逆转录聚合酶链反应内皮素转化酶内皮素抗血清,内皮素转化酶抑制剂内皮素受体内皮素受体拮抗剂
分类号: R573.1
类　型: 博士论文
年　份: 2002年
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内容摘要

应激性溃疡（stress ulcer SU）是临床危重疾病、严重创伤和严重心理障碍的常见并发症，具有较高的发病率和死亡率。目前由于它的确切发生机制尚不完全清楚，因而其防治效果不佳。研究证实，胃微循环障碍是SU发生的主要病理生理过程和根本条件,但参与该过程的血管调节介质尚不十分清楚。因此，从胃粘膜微循环的角度与分子生物学深度来研究影响胃粘膜微循环变化的因素（血管活性介质），对于揭示SU的发生机理以及临床防治具有重要的理论和临床意义。内皮素（endothelin　ET）-1是近年发现的迄今为止具有最强烈缩血管作用的一种内源性生物活性多肽，在调节血管张力，局部组织微循环灌流方面起着非常重要的作用。近年来国外有学者研究发现ET可引起胃粘膜损伤，但关于其与SU的确切关系与作用机制目前尚无定论，这方面的研究报道亦较少，而国内尚无这方面的研究报道。本研究从三个方面探讨内源性ET-1在SU发生中的可能作用与机制,进而为临床防治SU提供理论与实践上的指导。一、冷束缚应激大鼠血浆胃粘膜组织ET-1、GMBF、UI及ECS的变化和意义目的：探讨内皮素-1(ET-1)在应激性溃疡形成与发展中的意义。方法：采用SD大鼠冷束缚应激性溃疡模型(CRS)为研究对象，应用放免、免疫组化、激光多普勒血流仪及电镜等技术方法，动态检测正常对照组及应激1h、3h、6h、9h、12h各时相血浆、胃粘膜组织ET-1含量、胃粘膜血流量(GMBF)、溃疡指数(UI)、胃粘膜微血管内皮细胞间隙（ECS）的变化及ET-1在正常和CRS大鼠胃粘膜组织中的分布与表达变化。结果：①应激各组大鼠血浆、胃粘膜组织ET-1含量均较正常对照组ET-1含量明显升高。其中胃粘膜组织ET-1水平,在应激后12h内则呈持续升高状态(P<0.01),且随着胃粘膜ET-1水平的升高,伴有UI不断增加,两者呈显著正相关(r=0.98）；而血浆ET-1水平于应激6h达峰值后出现下降趋势，但仍高于正常(P<0.05)，它与UI的相关系数仅为r=0.43。②GMBF在应激后明显下降且随时间而递减(P<0.05)，应激1h后下降为正常对照的55.8%，6h下降为31.9%，12h只有正常对照的16%。GMBF与胃粘膜组织ET-1水平<WP=6>呈显著负相关(r=-0.89），而与血浆ET-1水平的相关系数仅为r=-0.61。③胃粘膜损伤指数UI在应激后明显增加且随应激时间延长不断加重(P＜0.01)。UI与胃粘膜组织ET-1含量呈显著正相关(r=0.98)，而与血浆ET-1水平的相关系数仅为r=0.43；UI与GMBF呈显著负相关(r=-0.98)。④免疫组化研究显示：应激后ET-1阳性表达的细胞数量与强度明显增加，其分布与正常胃组织中ET-1阳性细胞分布一致,主要分布在胃粘膜上皮细胞、胃粘膜肌层血管内皮细胞及血管与胃壁的平滑肌细胞等组织细胞的胞浆中。⑤透射电镜显示：应激组胃粘膜微血管内皮细胞明显损伤，内皮细胞肿胀、核变形、细胞器及基底膜有不同程度损伤，内皮细胞间缝隙连接显著增宽。结论：在冷束缚应激诱发大鼠胃粘膜组织损伤过程中，伴有内源性血浆胃粘膜组织ET-1含量明显升高，且与胃粘膜损伤程度密切相关，特别是胃粘膜组织ET-1水平与胃粘膜损伤程度更具相关性。提示ET-1可能参与应激性溃疡的形成与发展，其作用机制可能与其降低胃粘膜血流量和增加胃粘膜微血管通透性进而引起胃粘膜缺血性损伤有关。二、冷束缚应激大鼠胃粘膜组织中ET-1mRNA、ETARmRNA及ECEmRNA的表达目的：探讨应激状态下ET-1相关基因在胃粘膜组织中的表达及其意义。方法：以SD大鼠CRS应激溃疡模型为研究对象，应用RT-PCR、dot blot及norther blot杂交等技术方法，动态检测应激前及应激后1、3、6、9、12h各时相胃粘膜组织ET-1mRNA、ETARmRNA和ECEmRNA表达水平的变化情况。结果：应激组ET-1mRNA、ETARmRNA及ECEmRNA基因表达水平均较正常对照组明显升高(P<0.05)，且这种变化在应激12h内呈持续上升趋势,并与胃粘膜组织ET-1水平及UI呈显著正相关(r=0.93)，与GMBF水平呈显著负相关(r=-0.91)。结论：①正常胃粘膜组织可转录表达ET-1mRNA、ECEmRNA和ETARmRNA三种基因，具有合成ET-1和ETAR的能力，表明胃粘膜是ET-1作用的靶器官之一, ET-1也是一种胃功能调节肽。②在冷束缚应激状态下，胃粘膜组织可显著增加ET-1mRNA、ECEmRNA和ETARmRNA等基因的转录水平,引起胃粘膜组织ET-1和ETAR水平显著升高，进而参与胃粘膜损伤的病理生理过程，表明ET-1引起胃粘膜损伤有其坚实的分子生物学基础，提示ET-1与应激性胃粘膜损伤的形成与发展关系密切，是SU的重要致病因子。<WP=7>三、拮抗ET-1生物学效应对应激性胃粘膜损伤的影响目的：探讨ET-1生物学效应拮抗剂对应激性胃粘膜损伤的影响及其意义，从而为临床防治SU探索新的途径。方法：以大鼠CRS应激溃疡为模型，应用BQ123 （ETAR选择性拮抗剂）、ET-1Ab（抗血清）及Phosphoramidon（内皮素转化酶抑制剂）等工具药经左股静脉插管静脉内给药预处理CRS大鼠、来观察应激状态下它们对血浆胃粘膜组织ET-1水平、胃粘膜血流量GMBF及胃粘膜损伤UI变化的影响。结果：①与正常对照组相比较，单纯应激组血浆胃粘膜ET-1水平和UI明显增加，而GMBF明显下降（P＜0.01）；②与单纯应激组相比，用ET-1Ab、BQ123?

全文目录

英文缩写表  4-5
中文摘要  5-8
英文摘要  8-12
前言  12-14
第一部分：CRS大鼠血浆胃粘膜组织ET-1水平、GMBF、UI及ECS的变化和意义  14-39
  1．材料与方法  14-22
  2．结果  22-32
  3．讨论  32-36
  4．小结  36-37
  5．参考文献  37-39
第二部分：CRS大鼠胃粘膜组织中ET-1mRNA、ETARmRNA及ECEmRNA表达的变化和意义  39-66
  1．材料与方法  39-54
  2．结果  54-61
  3．讨论  61-64
  4．小结  64-65
  5．参考文献  65-66
第三部分：拮抗ET-1生物学效应对应激性胃粘膜损伤的影响及其机制  66-84
  1．材料与方法  66-69
  2．结果  69-75
  3．讨论  75-81
  4．小结  81-82
  5．参考文献  82-84
全文总结  84-85
文献综述  85-100
致谢  100-101
发表文章  101

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