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山（金）银花有效成分的分析和提取以及抑制巨噬细胞胆固醇蓄积作用的研究

作　者: 粟时颖
导　师: 廖瑞芳；郑兴
学　校: 南华大学
专　业: 药理学
关键词: 金银花绿原酸总黄酮木犀草苷 RAW264.7细胞胆固醇蓄积 Caveolin-1 SREBP-1
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:对金银花中主要有效成分进行分析。方法:高效液相色谱(HPLC)法测定金银花中绿原酸的含量,选用VP-ODS C18色谱柱(150mm×4.6mm),乙腈-0.4%磷酸溶液(13:87)为流动相,检测波长为327nm;照紫外-可见分光光度(UV-VIS)法,500nm波长处测定金银花溶液的吸光度,以芦丁为对照品,计算金银花中总黄酮的含量;HPLC法测定金银花中木犀草苷的含量,选用VP-ODS C18色谱柱(150mm×4.6mm),乙腈为流动相A,0.5%冰醋酸溶液为流动相B,按A(%)10→30,B(%)90→70,在0~30min内梯度洗脱,检测波长为350nm。结果:绿原酸进样量在0.2~1μg范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系(r =0.9996),金银花中绿原酸含量为2.72%。芦丁浓度在8~40μg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系(r=0.9998),金银花中总黄酮含量为6.46%。木犀草苷进样量在0.08～0.4μg范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9995),金银花中木犀草苷含量为0.065%。结论:绿原酸和总黄酮都是金银花的主要有效成分。第二部分:山银花有效成分的提取以及抑制巨噬细胞胆固醇蓄积作用的研究目的:考察山银花提取物抑制巨噬细胞胆固醇蓄积的作用。方法:运用中药提取分离技术,得到山银花的乙醇提取物,按照溶液极性大小的不同,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,得到石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相、水相等不同的组分。以石油醚相(药物1)、乙酸乙酯相(药物2)、正丁醇相(药物3)作为受试药物。体外培养鼠源性巨噬细胞(RAW264.7细胞),不同浓度的脂肪乳(20%脂肪乳与培养基比例分别为0:1、1:6、1:5、1:4、1:2、1:1)孵育RAW264.7细胞,再以最佳浓度脂肪乳孵育细胞不同时间(0、3、6、12、24、48h),油红O染色法观察细胞荷脂情况。进一步实验将细胞分成5组,即正常组、荷脂组(10%脂肪乳组)、10%脂肪乳+药物1组、10%脂肪乳+药物2组、10%脂肪乳+药物3组,油红O染色法观察细胞内脂粒变化,Western印迹法检测小凹蛋白-1(caveolin-1)的表达,反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测SREBP-1的mRNA表达。结果:油红O染色显示,在一定浓度和时间范围内,细胞中脂粒随脂肪乳浓度升高和荷脂时间的延长而增多,10%脂肪乳荷脂24h使细胞荷脂情况最佳;不同因素处理细胞24h,油红O染色显示,药物1组、2组、3组均使荷脂细胞的脂粒减少,且药物2组使脂粒减少最明显。Western印迹结果显示,荷脂组较正常组caveolin-1表达下调,药物1、2、3组caveolin-1的表达均较荷脂组有上调趋势,且药物2组上调最明显;免疫荧光检测显示,与荷脂组比较,药物1、2、3组能上调caveolin-1表达,且药物2组上调最明显。RT-PCR结果显示,荷脂组较正常组SREBP-1的mRNA表达上调,药物1、2、3组SREBP-1的mRNA表达均较荷脂组下调。结论:1.山银花提取物(药物1、2、3)具有抑制巨噬细胞胆固醇蓄积的作用,且药物2的作用较强;2.山银花提取物抑制巨噬细胞胆固醇蓄积的作用可能与上调caveolin-1表达有关;3.药物可能通过抑制SREBP-1的表达而上调caveolin-1的表达。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
引言  9-11
第一部分金银花有效成分的分析  11-24
  1 试药与仪器  11-12
  2 实验方法  12-14
  3 实验结果  14-22
  4 讨论  22-23
  5 结论  23-24
第二部分山银花有效成分的提取以及抑制巨噬细胞胆固醇蓄积作用的研究  24-40
  1 试药与仪器  24-25
  2 实验方法  25-28
  3 实验结果  28-37
  4 讨论  37-39
  5 结论  39-40
参考文献  40-42
附录  42-44
综述  44-52
  参考文献  48-52
发表文章  52-53
致谢  53

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