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HIV-1整合酶的四肽156KELK159在慢病毒载体基因整合过程中的作用研究

作　者: 李文娟
导　师: 陈金中
学　校: 复旦大学
专　业: 遗传学
关键词: HIV-1整合酶慢病毒载体四肽
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

HIV-1整合酶(HIV-1 integrase, HTV-1 IN)是HIV-1慢病毒载体中的关键因子,在HIV-1基因整合入宿主细胞基因组过程中起重要作用。除整合病毒基因组功能外,HIV-1 IN还参与病毒生命周期的很多重要过程,如影响病毒粒子形态、病毒DNA合成和核内运输等。本研究中,我们用酵母双杂交系统发现HIV-1 IN中的四肽156KELK159在HIV-1 IN与Daxx结合中发挥重要作用,缺失该四肽的HIV-1 IN无法与Daxx结合。为进一步探索156KELK159在HIV-1慢病毒载体基因整合及表达中的作用,我们利用三质粒包装系统分别包装出含野生型HIV-1 IN及含缺失156KELK159的HIV-1 IN两种均以EGFP为报告基因的慢病毒载体。使用p24病毒滴度检测试剂盒检测病毒滴度,同时抽取病毒RNA,利用实时定量PCR检测病毒液中的RNA拷贝数,结果发现相同p24含量的两种病毒中的RNA拷贝数也相同,故156KELK159对病毒载体的包装没有影响。进一步研究发现156KELK159在HIV-1慢病毒载体基因的整合过程中发挥重要作用。两种病毒分别感染293T细胞后,156KELK159的缺失使被感染细胞中表达报告基因的细胞比例明显降低,但进入细胞内及进入细胞核内的DNA水平未发生变化。逆转录实时定量PCR及FACS被用于检测感染维胞中报告基因EGFP的表达水平,结果发现156KELK159并不影响HIV-1慢病毒载体的报告基因表达。本研究结果为进一步揭示HIV-1慢病毒载体基因整合的调控机制提供了一定理论依据。

全文目录

中文摘要  5-6
Abstract  6-7
英文缩写词  7-9
第一部分实验研究  9-43
  第一节前言  9-14
    一、慢病毒基因治疗载体  9-11
    二. HIV-1 IN  11-13
    三. Daxx  13-14
  第二节材料与方法  14-29
    一、实验材料  14-17
    二、实验方法  17-29
  第三节实验结果  29-37
    一、重组慢病毒载体质粒的鉴定  29
    二、质粒构建  29-30
    三、HIV-1 IN四肽156KELK159是酵母双杂交中HIV-1IN与Daxx结合的关键位点  30-31
    四、HIV-1 IN四肽156KELK159不影响慢病毒载体的包装  31-32
    五、HIV-1 IN四肽156K-LK159在慢病毒载体基因整合中发挥重要作用  32-34
    六、HIV-1 IN四肽156KELK159不影响慢病毒载体基因表达  34-37
  第四节讨论  37-39
    一、156KELK159是HIV-1 In与Daxx结合的潜在作用位点  37
    二、HIV-1 IN的四肽156KELK159在HIV-1基因整合中的重要作用  37-38
    三、HIV-1 IN的四肽156KELKl59的应用潜力  38-39
  实验小结  39-40
  参考文献  40-43
第二部分论文综述  43-59
  1. HIV-1的基因结构及生活周期  43-45
  2. 慢病毒载体的发展  45-46
  3. 慢病毒载体的制备  46-47
  4. 慢病毒载体的应用  47-50
  5. 总结与展望  50-52
  参考文献  52-59
论文发表情况  59-60
致谢  60-62

HIV-1整合酶的四肽156KELK159在慢病毒载体基因整合过程中的作用研究

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