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血清/血浆中miR-21与食管癌关系的病例对照研究

作　者: 高永鑫
导　师: 李克
学　校: 汕头大学
专　业: 流行病与卫生统计学
关键词: miR-21 食管癌 血清 实时定量逆转录PCR 病例对照研究
分类号: R735.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


背景与目的：食管癌是世界上最常见的八大恶性肿瘤之一，我国食管癌发病率和死亡率位居世界之冠。食管癌就诊时多处于中晚期,相当部分的病人已不能手术治疗,总的五年生存率很低,但是早期食管癌手术10年生存率可达95.00%。因此提高食管癌早期诊断率以便进行二级预防,十分必要。目前较常用的诊断方法是食管功能检查、影像学检查、食管脱落细胞学检查和食管镜检查，但会给患者造成较大的伤害和痛苦，且敏感性较差。在过去对miRNA的研究中，发现miRNA能够成为肿瘤的一种新的补充生物标志物，而目前研究较多的血清/血浆miRNA则可能给肿瘤诊断提供了一个新的选择。miR-21作为一个重要的miRNA,在多种肿瘤细胞中异常表达,参与了细胞的分化、增殖和凋亡，与肿瘤发生发展密切相关,对于肿瘤的诊断、治疗和预后,具有重要的临床意义。然而，就目前文献报道来看，没有发现血清/血浆中miR-21与食管癌相关性的研究，本论文旨在揭示食管癌患者血清/血浆中miR-21的表达情况，评估血清/血浆中miR-21表达水平作为一个新的食管癌生物标志物的价值。方法：血液标本由汕头大学医学院附属第一医院检验科收集，冰盒送运，-80℃超低温冰箱保存。Trizol法提取22例食管鳞癌患者的血清/血浆及22例正常体检者血清/血浆总RNA，以及5例手术患者术前术后的血清/血浆总RNA，运用紫外分光光度仪和凝胶成像系统对所提总RNA的纯度和完整性进行分析。设计miR-21和内参照U6的茎环结构反转录引物和PCR扩增引物，利用SYBR Green实时荧光定量PCR法检测miR-21及内参照U6的表达水平。运用spss17.0对所得数据进行分析。结果: SYBR Green实时荧光定量PCR检测得到的U6和miR-21熔解曲线单一，PCR产物特异。22例正常体检者组血清/血浆miR-21的表达水平是食管鳞癌患者的1.70倍，但是两者差异无统计学意义（P>0.05）。5例手术患者术后血清/血浆miR-21的表达水平是术前的4.56倍（P<0.05）。食管癌血清/血浆miR-21的表达水平与性别、年龄、癌发部位、分化程度、分期、转移类型、有无放化疗无相关性（P>0.05)，但与有无手术、是否转移相关（P<0.05）。结论：食管癌患者血清/血浆中的miR-21表达水平低于正常体检者，但差别无统计学意义；食管癌患者血清/血浆miR-21的表达水平与有无手术、是否转移相关；血清/血浆中的miRNA具有较高的稳定性，检验剩余血能够很好的用于血清/血浆中miRNAs表达水平研究；检测患者血清/血浆miR-21的表达水平有可能为食管癌的诊断提供一个新的分子生物学指标，但后期仍需扩大样本量进行分析。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-8
本文常用英文缩略词对照表  8-12
第一章 前言  12-16
第二章 方法  16-24
  2.1 材料  16-20
    2.1.1 基本资料  16
    2.1.2 实验仪器与材料  16-17
    2.1.3 主要试剂  17-18
    2.1.4 实验器具的处理与准备  18
    2.1.5 试剂配制和准备  18-19
    2.1.6 引物设计  19-20
  2.2 方法  20-24
    2.2.1 血清/血浆标本收集及处理  20
    2.2.2 外周血总RNA 的提取  20-21
    2.2.3 茎环引物处理  21
    2.2.4 逆转录合成cDNA（以20μl 反应体系为例）  21-22
    2.2.5 荧光实时定量PCR（以20μl 反应体系为例）  22-23
    2.2.6 产物检测  23
    2.2.7 统计方法  23-24
第三章 结果  24-31
  3.1 用于实验的22 例患者的临床病理资料（见表3-1）  24-25
  3.2 食管癌患者血清/血浆中RNA 纯度和完整性  25-26
  3.3 血清/血浆中miR-21 和U6 的引物验证  26-27
  3.4 血清/血浆中的miR-21 和U6 RT-PCR 扩增曲线及扩增产物熔解曲线  27-28
  3.5 血清/血浆中miR-21 相对表达量的检测结果  28-29
  3.6 miRNA-21 表达水平与食管癌临床病理指标之间的关系分析  29-30
  3.7 食管癌患者手术前后外周循环血液中miR-21 表达水平检测结果的比较  30-31
第四章 讨论  31-36
  4.1 miR-21 的概述  31-32
  4.2 流行病学描述分析与试验方法  32
  4.3 miR-21 在病例对照血清/血浆中的表达  32-33
  4.4 血清/血浆中miR-21 的表达与临床病理特征之间的关系  33-34
  4.5 血清/血浆中miRNA 的稳定性  34
  4.6 实验创新点  34-35
  4.7 实验不足  35-36
第五章 结论  36-37
参考文献  37-41
综述  41-58
  参考文献  52-58
致谢  58-59
在读期间发表文章  59-60
本人简历  60

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 食管肿瘤
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