学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠的神经保护作用

作　者: 王蓬文
导　师: 孙建宁
学　校: 北京中医药大学
专　业: 中药药理学
关键词: 阿尔茨海默病 姜黄素 APP/PS1双转基因小鼠 β-淀粉样蛋白 Aβ级联反应 胰岛素信号转导
分类号: R285.5
类　型: 博士论文
年　份: 2011年
下　载: 204次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一种与年龄相关的以进行性记忆和认知功能障碍为特征的神经变性病。特征性病理变化表现为胆碱能神经元功能障碍、神经元和突触丢失、细胞外β-淀粉样肽(Amyloid beta, Aβ)聚集形成老年斑(senile plaques, SPs)和细胞内高度磷酸化的tau蛋白形成神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles, NFTs)。AD主要的神经分子病理改变是蛋白质的异常表达和加工。分子生物学的进展为揭示脑内这些蛋白质合成、运输和聚集机制提供了所需工具。本研究旨在通过姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠脑内Aβ42/Aβ40的比例及ADDLs含量的影响,并进一步研究ADDLs和胰岛素信号转导通路的关系,探讨姜黄素神经元保护的作用机制,客观评价其疗效,为开发AD的中药防治提供理论依据。材料和方法1.采用APP/PS1双转基因小鼠及同月龄同背景的正常小鼠作为实验对象,每组12-15只。中药大、中、小剂量治疗组于3月龄对小鼠实施姜黄素灌胃治疗,罗格列酮组给予罗格列酮灌胃,1次/日,连续治疗3个月2.应用Morris水迷宫检测小鼠空间学习记忆能力,评价姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠认知功能的影响。3.运用免疫组织化学方法观察治疗前后APP/PS1双转基因小鼠海马CA1区Shank1和PSD95的变化,运用电子显微镜观察各组小鼠海马CA1区神经元和突触的改变,评价姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠突触结构和功能的影响。4.运用免疫组织化学和Western-blot方法观察APP/PS1双转基因小鼠治疗前后IDE、PS2、Aβ42、Aβ40和ADDLs的变化,判断姜黄素对Aβ级联反应的影响。5.运用免疫组织化学、Western-blot和RT-PCR方法观察APP/PS1双转基因小鼠InR、IRS-1等胰岛素信号转导通路相关蛋白的变化,判断姜黄素对胰岛素信号转导通路的影响。实验结果1.姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠行为学和学习记忆的影响在Morris水迷宫实验中,与正常对照组相比模型组小鼠的逃避潜伏期和游泳距离分别明显延长和延长(P<0.01和P<0.05)；与模型组小鼠相比,罗格列酮组和姜黄素中剂量组小鼠的逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),姜黄素大剂量组小鼠的逃避潜伏期缩短(P<0.05),尽管如此,姜黄素大剂量组和姜黄素小剂量组与阳性药物组相比逃避潜伏期长(P<0.05)；与模型组小鼠相比,罗格列酮组、姜黄素中剂量和姜黄素大剂量组的小鼠游泳距离缩短(P<0.01和P<0.05)。2.姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠神经元以及突触相关蛋白表达的影响超微结构：电镜观察正常对照组海马CA1区神经元和神经毡内结构均正常。模型组小鼠海马CA1区神经元出现程度不等的退行性变。细胞核形态不规则,部分核内染色质浓集；胞浆内脂褐素、脂滴增多,高尔基体囊泡扩张,粗面内质网离散,多聚核糖体解聚,部分线粒体变性。神经毡内可见髓鞘变性,突触数量减少、结构异常,突触小泡聚集增多。姜黄素可使突触增加,并使上述变化有不同程度的改善。免疫组织化学染色结果：模型组海马CA1区PSD-95和Shank1阳性细胞数较正常对照组明显减少(P<0.01),罗格列酮组和姜黄素阳性细胞数较模型组增加(P<0.05)。Western blot结果：与正常对照组相比模型组PSD-95蛋白表达明显减少(P<0.01)；而与模型组相比罗格列酮组和姜黄素组蛋白表达增多(P<0.05)。3.姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠Aβ的影响免疫组织化学染色结果：模型组小鼠海马CA1区Aβ生成酶PS2阳性细胞较正常对照组明显增加(P<0.01)；罗格列酮组,姜黄素大、中、小剂量组小鼠海马CA1区PS2阳性细胞明显减少(P<0.01)。模型组小鼠海马CA1区Aβ降解酶IDE和NEP阳性细胞较正常对照组明显减少(P<0.01),与模型组相比,姜黄素中剂量组小鼠海马CA1区IDE阳性细胞增加(P<0.05)；姜黄素大、中、小剂量组小鼠海马CA1区NEP阳性细胞增加(P<0.05)。免疫组织化学染色的Aβ40和Aβ42阳性细胞计数模型组均较正常对照组小鼠阳性细胞表达明显增加,其中Aβ42阳性细胞计数增加更加明显；与模型组小鼠相比罗格列酮组和姜黄素治疗各组小鼠阳性细胞表达明显减低。模型组小鼠海马CA1区Aβ40、Aβ42、ADDLs阳性细胞平均灰度值较正常对照组明显降低(P<0.01),姜黄素中剂量组、姜黄素小剂量组阳性细胞平均灰度值同模型组相比增加(P<0.05)。Western blot结果：各蛋白表达结果与免疫组化相符。4.姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠胰岛素信号转导通路的影响免疫组织化学染色结果：与正常对照组相比,模型组小鼠海马InR、IRS-1阳性细胞计数明显增加(P<0.05和P<0.01)；与模型组相比罗格列酮组和姜黄素中剂量组InR、IRS-1阳性细胞计数增加得到改善(P<0.05和P<0.01)。与正常对照组相比,模型组小鼠海马CA1区p-IRS-1、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达均有不同程度的降低(P<0.05或P<0.01),与模型组相比罗格列酮组和姜黄素中剂量组p-IRS-1、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白阳性细胞计数增加(P<0.05或P<0.01)。Western blot结果：各蛋白表达结果与免疫组化相符。RT-PCR结果：与正常对照组相比模型组小鼠海马InR mRNA和IRS-1 mRNA表达明显增加,罗格列酮组和姜黄素大、中、小剂量组可使其表达有不同程度的恢复。结论姜黄素保护神经元的机制是通过改善胰岛素信号转导障碍,减少Aβ42和ADDLs生成并增加其降解,影响Ap级联反应起作用的。

全文目录


中文摘要  5-8
Abstract  8-13
英文缩略词  13-16
文献综述  16-78
  综述Ⅰ  16-42
    参考文献  31-42
  综述Ⅱ  42-78
    参考文献  66-78
引言  78-83
实验一 姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠行为和学习记忆的影响  83-90
  前言  83-84
  材料和方法  84-86
  结果  86-88
  讨论  88
  结论  88-89
  参考文献  89-90
实验二 姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠神经元以及突触相关蛋白表达的影响  90-111
  前言  90-91
  材料和方法  91-100
  结果  100-106
  讨论  106-109
  结论  109-110
  参考文献  110-111
实验三 姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠Aβ的影响  111-130
  前言  111-112
  材料和方法  112-113
  结果  113-125
  讨论  125-127
  结论  127-128
  参考文献  128-130
实验四 姜黄素对APP/PS1双转基因小鼠胰岛素信号转导通路的影响  130-162
  前言  130-132
  材料和方法  132-135
  结果  135-152
  讨论  152-159
  结论  159-160
  参考文献  160-162
创新点  162-163
致谢  163-164
个人简历  164-167
附页  167-185
  电镜图片  167-171
  水迷宫彩图  171-173
  免疫组织化学彩图  173-185
  解链曲线彩图  185

相似论文

  1. 磷酸化介导的UGT1A3代谢活性差异的初步研究,R346
  2. 阿斯匹林、姜黄素对人HT-29、SW480细胞中β-catenin、COX-2及PGE2的影响,R735.35
  3. 姜黄素对运输应激状态下生长猪海马NO-NOS系统的影响,S858.28
  4. 辛伐他汀对伴高脂血症的阿尔茨海默病双转基因小鼠作用研究,R589.2
  5. 小电导钙激活性钾通道在阿尔茨海默病小鼠中的作用,R749.16
  6. 赤峰市部分地区阿尔茨海默病患者血脂和血微量元素的初步分析,R749.16
  7. 血清25-羟维生素D水平与老年认知功能障碍的相关性研究,R749.1
  8. 生活因素对老年认知功能的影响,R749.1
  9. 姜黄素对顺铂所致的小鼠胃肠道损伤的影响,R285.5
  10. 凋亡相关蛋白激酶-1基因多态性与迟发性阿尔茨海默病的相关性研究,R749.16
  11. 氨基胍改善甲基乙二醛诱导的SK-N-SH细胞中tau蛋白过度磷酸化,R749.16
  12. 药物接枝可降解聚酯弹性体的合成和表征,TQ334.1
  13. 姜黄素对人肝癌耐药细胞系Bel7402/5-Fu耐药逆转作用的实验研究,R285.5
  14. 高锌摄入导致AD样病理改变及记忆障碍,R749.16
  15. 载姜黄素MPEG-P（CL-co-PDO）聚合物胶束的研究,R283
  16. β2肾上腺素受体激动剂克仑特罗对PC12细胞的损伤作用及其机制研究,R96
  17. 17α雌二醇对APP/PS1 N2a基因转染细胞Aβ生成的影响及其机制的研究,R739.4
  18. 大鼠内侧隔核注射淀粉样β蛋白影响海马theta节律和长时程增强的在体电生理研究,R749.16
  19. 淀粉样β蛋白神经毒作用的α7烟碱型胆碱能受体机制：在体动物电生理和行为学研究,R749.16
  20. cPLA2基因多态性与中国湖南汉族人群阿尔茨海默病的相关性研究,R749.16
  21. 家族性阿尔茨海默病致病基因突变分析,R749.16

中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
© 2012 www.xueweilunwen.com