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鲫卵源致病性水霉的分离与鉴定及其生物学特性研究

作　者: 夏文伟
导　师: 杨先乐
学　校: 上海海洋大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 鱼卵水霉病 ITS序列游动孢子生物学特性
分类号: S943
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 26次
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内容摘要

鱼类人工繁殖孵化过程中,水霉病危害很严重,常常造成重大经济损失,寻找合适的防治水霉病的方法具有重要意义。本文从病原入手,在患有水霉病的鲫卵上分离一株致病性菌株JL1,通过形态学和分子生物学形结合的方法对其进行了鉴定,然后研究了病原与药物的相互作用,即菌株JL1不同发育阶段对3种药物的敏感性,最后从3种药物中选取对菌株JL1作用效果较好的成分制成制剂,研究了制剂对鱼卵水霉病的防治效果。主要研究结果如下:1鲫卵水霉病病原的分离与鉴定从患病的彭泽鲫卵上分离3株丝状菌,经人工感染试验证实其中一株丝状菌JL1对彭泽鲫卵具有致病性,并进一步研究了其形态特征,开展了ITS rDNA序列分析。实验结果表明,菌株JL1菌丝为透明管状结构,中间无横隔,分枝较少;游动孢子囊多数呈棒状,游动孢子呈多排排列,发育成熟后从孢子囊中释放出来,并迅速游离;藏卵器呈球形,与雄器同枝或异枝。菌株JL1的ITS rDNA序列与GenBank基因库中水霉属菌株自然聚类,同源性高达99%,与异枝水霉S. diclina、多子水霉S. ferax、长茎水霉S. longicaulis的亲缘关系较近。结合形态特征与ITS序列鉴定的结果,判定菌株JL1为水霉菌(Saprolegnia sp.)。2菌株JL1的生长特性及温度和营养对游动孢子产生及萌发的影响试验结果显示:菌株JL1在5°C-30°C、pH 4-11范围内均能生长,最适生长温度和pH范围分别为25°C-30°C和6-9。同时菌株JL1对氯化钠敏感,质量分数为2% NaCl即可抑制其生长,可以作为该病防治的依据。菌株JL1在15°C-30°C均能产生游动孢子,35°C时由于菌丝生长受到抑制而不能产生游动孢子,最适温度范围在20°C-25°C;25°C时在水中培养36h后,游动孢子产生的量最大;20°C时培养48h,游动孢子的量达到最大。菌株JL1游动孢子在15°C-30°C能萌发,35°C条件下不能萌发,最适温度范围为20°C-25°C。菌株JL1在营养丰富的条件下,菌丝生长旺盛,但不产生游动孢子,同时丰富的营养能促进游动孢子萌发。3菌株JL1不同发育阶段对3种药物的敏感性3种抗水霉药物对菌株JL1不同发育阶段的试验结果显示:水霉孢子比菌丝对3种药物更敏感。其中化合物H对菌株JL1菌丝生长、孢子囊形成、游动孢子释放、游动及萌发等5个阶段的有效抑制浓度分别为10 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、2.5 mg/L、5 mg/L。土槿皮提取物对菌株JL1不同发育阶段的有效抑制浓度分别为5 mg/mL、1 mg/mL、5 mg/mL、5 mg/mL、2.5 mg/mL。MBT对菌株JL1菌丝生长、孢子囊形成、游动孢子释放和萌发的有效抑制浓度分别为1 mg/L、0.5 mg/L、1 mg/L、0.5mg/L,对游动孢子游动的抑制作用较弱。4、药物对鱼卵水霉病的防治试验从效果、安全、成本、加工工艺等综合考虑,选取化合物H作为抗水霉药物的主要成分,添加适当的增效剂、填充剂、分散剂等成分,制成化合物H制剂。化合物H制剂对鲫卵胚胎发育试验结果显示:化合物H制剂浓度在50 mg/L时对鲫卵的孵化率和成活率稍有降低;在20 mg/L时鲫卵的孵化率和成活率与对照组没有明显差异(P<0.05)。使用化合物H制剂泼洒,与鱼卵短时间接触,浓度100 mg/L,每12 h用药一次,连用3次,能降低网箱流水孵化团头鲂卵发霉率,提高孵化率;使用化合物H制剂全池泼洒,与鱼卵长时间接触,浓度15 mg/L,每天用药1次,连续用药3天,能明显降低网片静水孵化的鲫鱼卵的发霉率,提高孵化率。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-12
引言  12-13
第一章水霉病及其防治综述  13-21
  1 水霉病病原  13-15
    1.1 病原的种类及特征  13
    1.2 病原的鉴定  13-15
  2 水霉的游动孢子  15-17
    2.1 游动孢子的基本结构及特征  15-16
    2.2 游动孢子的形成  16
    2.3 游动孢子的游动  16-17
    2.4 游动孢子包囊形成及萌发  17
  3 水霉病症状及发病条件  17
  4 水霉病的危害  17-18
  5 水霉病的防治手段  18-20
    5.1 生态防治  18-19
    5.2 免疫防治  19
    5.3 药物防治  19-20
  6 研究的意义及主要路线  20-21
第二章鲫卵源致病性水霉的分离与鉴定  21-27
  1 材料与方法  21-23
    1.1 试验材料  21
    1.2 菌株的分离及纯化  21-22
    1.3 菌株的鉴定  22
    1.4 菌株的人工感染试验  22-23
  2 结果与分析  23-26
    2.1 菌株的分离  23
    2.2 人工感染试验  23
    2.3 致病菌株的鉴定  23-26
  3 讨论  26-27
第三章菌株JL1 不同发育阶段对药物的敏感性  27-46
  第1节温度、pH、盐度对菌株JL1 生长的影响  27-31
    1 材料与方法  27-28
      1.1 试验材料  27
      1.2 分离菌株生长特性的测定  27-28
      1.3 实验数据处理方法  28
    2 结果与分析  28-30
      2.1 温度对致病菌株生长的影响  28
      2.2 pH 对致病菌株生长的影响  28-29
      2.3 氯化钠对致病菌株生长的影响  29-30
    3 讨论  30-31
  第2节不同培养条件对菌株JL1 游动孢子产生及萌发的影响  31-36
    1 材料与方法  31-32
      1.1 试验材料  31
      1.2 温度、营养对游动孢子产生的影响  31-32
      1.3 温度、营养对游动孢子萌发的影响  32
      1.4 数据处理  32
    2 结果与分析  32-34
      2.1 温度对游动孢子产生的影响  32-33
      2.2 营养对游动孢子产生的影响  33
      2.3 温度对游动孢子萌发的影响  33-34
      2.4 营养对游动孢子萌发的影响  34
    3 小结  34-36
  第3节菌株JL1 不同发育阶段对药物的敏感性  36-46
    1 材料与方法  36-37
      1.1 试验药物及培养基  36
      1.2 试验菌株  36
      1.3 药物对菌丝生长和孢子囊形成的影响  36-37
      1.4 药物对游动孢子释放和游动的影响  37
      1.5 药物对游动孢子萌发的影响  37
      1.6 数据处理  37
    2 结果  37-44
      2.1 药物对菌丝生长和孢子囊形成的影响  37-40
      2.2 药物对游动孢子释放的影响  40-41
      2.3 药物对游动孢子游动的影响  41
      2.4 药物对游动孢子萌发的影响  41-44
    3 讨论  44-46
第四章化合物H 对鱼卵水霉病的防治试验  46-56
  第1节水霉对鲫卵的感染试验  46-50
    1 材料与方法  47-48
      1.1 试验材料  47
      1.2 孵化用水中水霉的检测  47
      1.3 孢子数量对鱼卵感染率的影响  47-48
    2 结果与分析  48-49
      2.1 孵化用水中水霉的检测  48-49
      2.2 不同孢子浓度对鱼卵的感染试验  49
    3 小结  49-50
  第2节化合物H 对鱼卵水霉病的防治试验  50-56
    1 材料与方法  50-52
      1.1 试验地点  50
      1.2 试验材料  50
      1.3 化合物H 制剂对彭泽鲫卵胚胎发育的影响  50-51
      1.4 化合物H 制剂对流水网箱孵化团头鲂卵水霉病的防治试验  51
      1.5 化合物H 制剂对静水网片孵化鲫卵水霉病的防治试验  51
      1.6 孵化时间、发霉率和孵化率的测定  51-52
      1.7 数据处理  52
    2 结果  52-55
      2.1 化合物H 制剂对彭泽鲫卵胚胎发育的影响  52
      2.2 化合物H 制剂对流水网箱孵化的团头鲂卵水霉病的防治试验  52-54
      2.3 化合物H 制剂对静水网片孵化鲫卵水霉病的防治试验  54-55
    3 小结  55-56
第五章本文的主要结论及研究展望  56-57
  1 本文主要结论  56
  2 研究展望  56-57
参考文献  57-64
附录：论文发表情况  64-65
致谢  65

鲫卵源致病性水霉的分离与鉴定及其生物学特性研究

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