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栉孔扇贝（Chlamys Farreri）两个卵黄蛋白原转录本的发育表达图式

作　者: 李昀
导　师: 张志峰
学　校: 中国海洋大学
专　业: 遗传学
关键词: 栉孔扇贝 卵黄蛋白原 发育表达 性腺 肝胰腺 选择性剪接
分类号: S917.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 36次
引　用: 1次
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内容摘要


卵黄蛋白原(vitellogenin,VTG)是卵黄蛋白(Vn)的前体,能够为发育中的胚胎和幼虫提供营养。对于卵生动物来说,卵黄物质的形成与积累是卵子发生过程中的重要事件。卵黄蛋白是卵黄物质的最主要成分,行使着重要的生物学功能,因此作为卵黄蛋白前体的卵黄蛋白原,具有很高的科研价值。卵黄蛋白原在脊椎动物、昆虫和甲壳动物中已经得到广泛而深入的研究,然而,这些研究仅限于成体特别是性腺发育周期中,对个体发育过程中卵黄蛋白原的特征报道甚少。本研究选取我国重要的水产经济物种——栉孔扇贝(Chlamys farreri)为研究对象,采用cDNA末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术获得了栉孔扇贝卵黄蛋白原基因的一个小转录本的cDNA序列(命名为Cf-vtg2),对其序列特征进行了分析。进一步利用Real-Time PCR和原位杂交技术分析并比较了Cf-vtg2与已获得的栉孔扇贝卵巢Cf-vtg1转录本的个体发育表达图式以及表达差异。另外,利用组织学切片技术对栉孔扇贝的性腺分化进行了观察。本实验克隆得到的Cf-vtg2转录本的cDNA序列长1719 bp,编码564个氨基酸残基。Cf-VTG2与Cf-VTG1的N末端序列几乎完全一致,相似性达99%以上。RT-PCR分析显示,Cf-vtg1 mRNA仅在卵巢中表达,在肝胰腺中表达Cf-vtg2小转录本。Real-Time PCR和原位杂交结果均显示,Cf-vtg (包括Cf-vtg1和Cf-vtg2)在栉孔扇贝的未受精卵、受精卵至D形幼虫中均有表达,说明其母源性的表达特点。其中受精卵时表达量最高,受精之后表达量逐渐下降,至D形幼虫表达量最低,壳顶幼虫未能检测到目的基因的表达。当个体发育至壳高为7 mm的幼贝时,Cf-vtg2首先在肝胰腺中检测出,并且雌雄肝胰腺中的表达量没有显著性差异。原位杂交结果显示Cf-vtg的阳性信号在未受精卵、受精卵至担轮幼虫期呈均匀分布,D形幼虫时信号开始集中于内脏团处,壳顶幼虫时信号消失。在精卵巢分化前后,信号出现在肝胰腺实质细胞中,当个体进入第一次性腺发育周期时,信号则特异性的定位于卵巢的滤泡细胞中。在发育中的精巢中没有检测到目的基因的表达。

全文目录


摘要  5-6
Abstract  6-10
第一章 前言  10-23
  1 卵黄蛋白原在卵子发生中的作用  10-13
    1.1 卵黄蛋白原与卵子发生  10
    1.2 卵黄蛋白原的合成  10-13
  2 卵黄蛋白原的结构  13-17
    2.1 卵黄蛋白原的蛋白结构  13-14
    2.2 卵黄蛋白原基因的结构  14-17
  3 卵黄蛋白原的发育表达  17-18
  4 卵黄蛋白原的生物学功能  18-21
    4.1 免疫防御  18-19
    4.2 载体功能  19-20
    4.3 为精子提供营养  20
    4.4 酶活性  20
    4.5 其他功能  20-21
  5 海洋双壳类动物卵黄蛋白原的研究进展  21-22
  6 本研究的目的及意义  22-23
第二章 栉孔扇贝卵黄蛋白原基因小转录本的克隆  23-36
  1 材料与方法  23-29
    1.1 实验材料  23-24
    1.2 实验方法  24-29
  2 实验结果  29-33
    2.1 栉孔扇贝Cf-vtg2 cDNA 序列的获得  29-30
    2.2 栉孔扇贝Cf-vtg2 序列特征  30-32
    2.3 栉孔扇贝Cf-vtg2 与Cf-vtg1 序列比对  32-33
  3 讨论  33-36
第三章 栉孔扇贝Cf-vtg1 和 Cf-vtg2 基因在发育过程中的定量分析  36-54
  1 材料与方法  36-42
    1.1 实验材料  36-38
    1.2 实验方法  38-42
  2 实验结果  42-48
    2.1 Cf-vtg1 和Cf-vtg2 mRNA 在卵巢和幼贝肝胰腺的表达差异  42-44
    2.2 卵黄蛋白原mRNA 在栉孔扇贝个体发育过程中表达量分析  44-48
  3 讨论  48-54
    3.1 Cf-vtg1 和Cf-vtg2 两个转录本的表达差异  48-49
    3.2 栉孔扇贝卵黄蛋白原的母源性表达  49-51
    3.3 Cf-vtg2 在幼贝肝胰腺及雄性个体中的表达  51-54
第四章 栉孔扇贝卵黄蛋白原基因（Cf-vtg）的发育表达图式  54-70
  1 材料与方法  54-60
    1.1 实验材料  54-55
    1.2 实验方法  55-60
  2 实验结果  60-66
    2.1 Cf-vtg mRNA 在栉孔扇贝胚胎和早期幼虫发育过程中的表达  60-61
    2.2 栉孔扇贝幼贝中Cf-vtg 基因发育表达图式  61-66
  3 讨论  66-70
    3.1 壳高7-9 mm 的栉孔扇贝发生性腺分化  66-68
    3.2 Cf-vtg mRNA 在栉孔扇贝性腺发育与分化的关键时期表达  68-70
总结  70-71
参考文献  71-80
致谢  80-81
个人简历  81
发表的学术论文  81

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