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带状疱疹后疼痛治疗前后蛋白质组学生物标记特征研究

作　者: 陆景珊
导　师: 张贵君
学　校: 北京中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 蛋白质组学 带状疱疹后疼痛 中药的信息物质鉴定 荧光染色
分类号: R752.12
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


蛋白质组学是在后基因组时代出现的一个新兴的研究领域,它的主要任务是识别鉴定细胞、组织或机体的全部蛋白质。主要应用领域是医药市场和疾病的机理研究。带状疱疹后疼痛的确切机理目前尚不明确,蛋白质组学的发展使人们有了新的认识工具。本研究是治疗带状疱疹后疼痛中药“复元镇痛汤”研究的一部分,隶属于国家教育部重大项目——“中药复方功能主治与其药效物质基础的相关性研究”课题(课题编号00176)。1研究目的本研究通过荧光标记和双向电泳的方法考查带状疱疹后疼痛患者治疗前后CSF蛋白质表达的差异,探讨用蛋白质组学方法解释PHN发病机理的可行性,为最终能够找到该病的疾病特异性蛋白DSPs作准备,为中药的信息物质鉴定和药效组分生物筛选奠定基础。2研究内容和方法2.1 Ettan 2-D Quant定量试剂盒进行总蛋白含量测定;2.2分析型凝胶的样品CyDyeTM DIGE荧光标记。应用CyDyeTM DIGE荧光标记的双向凝胶电泳,分离并分析带状疱疹患者治疗前后CSF的蛋白质表达差异。通过荧光扫描及差异分析确定表达量差异显著的蛋白质点;2.3制备型凝胶电泳质谱分析,应用基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)确定这些蛋白质的种类。3研究结果所得荧光图像使用DeCyder差异分析软件处理比较。在凝胶电泳图谱2500个蛋白质点中,统计得出有效变化蛋白质点145个,其中浓度减少的蛋白质点103个,增加的42个。取其中的一个蛋白质点A,经酶解消化后,进行MALDI-TOF-MS分析,通过查询数据库得知该蛋白为Complement factor B。包括该蛋白在内,一共用质谱鉴定出32个蛋白质。4结论应用蛋白质组学的方法可以找到带状疱疹患者治疗前后CSF中差异表达的蛋白,并通过质谱和数据库查询确定差异表达蛋白的种类。证明该方法寻找带状疱疹的DSPs是可行的。为采用生物方法筛选带状疱疹后疼痛的药物及其药物的生物鉴定方法奠定了基础。5创新点5.1荧光染色的蛋白质组学方法在带状疱疹后疼痛机理研究中的应用。5.2蛋白质组学在中药信息物质鉴定领域的应用。

全文目录


中文摘要  5-7
Abstract  7-9
英文缩略语  9-10
前言  10-11
综述一：神经性疼痛的脑脊液蛋白质组学研究进展  11-22
  参考文献  17-22
综述二：带状疱疹后疼痛的发病机理  22-26
实验研究  26-28
  实验材料  26
  试剂  26
  溶液配方  26-27
  仪器  27-28
第一部分：样品制备与总蛋白的含量测定  28-37
  材料与试剂  28-29
    1 材料与试剂  28
    2 主要仪器  28-29
  实验方法  29-34
    1 样品处理  29
    2 蛋白质含量测定  29-34
      原理：比色定量法  29
      特点  29-30
      标准曲线绘制  30-32
      蛋白质含量测定  32
      流程图  32-34
  结果  34
  讨论  34-36
    1 蛋白质样品溶解液的作用  34-35
    2 样品处理  35
    3 Ettan 2-D Quant定量试剂盒  35-36
  参考文献  36-37
第二部分：分析型凝胶样品CyDyeTM DIGE荧光标记及分离分析  37-55
  材料与试剂  37-38
    1 材料与试剂  37-38
    2 仪器  38
  实验方法  38-46
    1 荧光标记  38
    2 双向电泳分离  38-42
      第一向固相pH梯度等电聚焦电泳（IEF with IPG）  39-41
        平衡  40
        SDS-PAGE凝胶制备  40-41
      第二向电泳(SDS-PAGE)  41-42
        SDS-PAGE简介  41
        实验操作步骤  41-42
    3 分析型凝胶的成像和DeCyder差异分析  42-46
      荧光扫描及差异分析  42
      银染  42
      总流程图  42-46
  结果  46-52
  讨论  52-54
    1 高丰度蛋白的干扰  52-53
    2 荧光染料的使用  53
    3 有差异表达的蛋白  53-54
  参考文献  54-55
第三部分：部分有效变化蛋白质的质谱鉴定  55-86
  材料与试剂  56
    1 材料与试剂  56
    2 主要仪器  56
  实验方法  56-58
    1 样品制备、分离及染色  56
    2 蛋白消化  56-57
    3 脱盐  57
    4 质谱分析  57
    5 数据库查询  57-58
  总流程图  58-60
  结果  60-85
  讨论  85
  参考文献  85-86
结语  86-87
致谢  87-88
个人简历  88

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中图分类: > 医药、卫生 > 皮肤病学与性病学 > 皮肤病学 > 病毒性皮肤病 > 疱疹 > 带状疱疹
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