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大鼠磨牙成釉器与牙乳头相互作用的研究

作　者: 周静
导　师: 文玲英；金岩
学　校: 第四军医大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: 大鼠磨牙成釉器牙乳头相互作用肾被膜下移植
分类号: R78
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

牙齿发育是上皮与间充质相互作用的结果,目前对牙齿早期发育的研究较多,但对后期的牙齿发育,特别是牙根的发育研究较少。牙胚发育至胚胎12d时,指导牙齿形成的能力由上皮转移到了间充质内,此后间充质(牙乳头)可以指导成釉器上皮的形态发生,诱导非牙源性上皮形成牙齿组织。由此推测根部的牙乳头内可能也储存着指导牙根发育的信息,且与冠部牙乳头不同,从而导致了牙冠与牙根不同的发育模式。本课题采用组织学、免疫组织化学,体外培养,肾被膜下移植,RT-PCR等方法拟对大鼠磨牙成釉器与冠、根部牙乳头重组体进行研究,观察它们的相互作用,以探讨根部牙乳头是否可诱导成釉器形成上皮根鞘(Hertwig’s epithelial root sheath,HERS)及是否可形成牙根。主要内容和结果如下:实验一、大鼠第一、二磨牙牙胚成釉器与牙乳头发育的组织学观察对出生后(Postnatal,PN)0-7d的SD仔鼠每天处死2只,常规制备下颌骨组织切片,HE染色,镜下观察第一、二磨牙牙胚发育状况。结果发现第一、二磨牙牙胚发育时序相差约2-3d,PN6-7d时第一磨牙的牙冠已基本形成,成釉细胞与HERS细胞可明显区分,可采用机械的方法将牙根与牙冠分离,此时的根部牙乳头未分化可用于重组实验。而PN1-2d时的第二磨牙牙胚仍处于钟状期,HERS尚未形成,内釉上皮与牙乳头细胞未能分化可用作重组实验的上皮和冠部牙乳头的来源,从而为下面的实验打下基础。实验二、大鼠磨牙成釉器与冠、根部牙乳头组织重组的体内种植实验选取PN2d的SD仔鼠第二磨牙的成釉器与其牙乳头或PN7d的第一磨牙根部牙乳头分别重组,经体外培养后肾被膜下移植,2w后制备标本镜下观察,结果发现,第二磨牙成釉器与冠部牙乳头重组后可继续发育形成牙齿样的结构,而成釉器与第一磨牙根部牙乳头重组后形成了骨样的组织,上皮细胞被包裹于其中或位于其外侧,部分上皮细胞发生了角化。结果表明根部牙乳头不能诱导成釉器上皮分化为成釉细胞,也未形成HERS。冠、根部牙乳头的功能不尽相同。实验三、大鼠磨牙成釉器上皮与冠、根部牙乳头细胞重组的体内种植实验通过大鼠PN2d第二磨牙成釉器上皮细胞与PN7d第一磨牙根部牙乳头细胞重组后体内种植,发现形成了结构更为紊乱的骨样物质,上皮细胞位于纤维成分中,并发现有纤维组织被埋入骨样物质中,与之呈一定的角度,类似牙周膜纤维结构,说明经根部牙乳头细胞诱导的成釉器上皮细胞有向牙根发育模式转变的趋势,但还不能形成牙根结构。实验四、大鼠磨牙根部牙乳头细胞对成釉器上皮细胞釉基质蛋白表达的影响将PN2d的仔鼠第二磨牙冠部牙乳头和PN7d第一磨牙根部牙乳头细胞分别培养2d后的条件培养液,加入PN2d第二磨牙成釉器上皮细胞培养液中,对诱导后的成釉器上皮细胞进行RT-PCR检测。结果发现根部牙乳头诱导后的成釉器上皮细胞不表达釉原蛋白,表达成釉蛋白,与体外培养的HERS细胞釉基质蛋白的表达相似。但根部牙乳头是否能诱导成釉器上皮形成HERS仍需进一步的研究。总之,本实验发现根部牙乳头不能诱导成釉器上皮分化,且诱导后不表达釉原蛋白,这也许是牙冠发育模式与牙根发育模式的不同所在。

全文目录

缩略语表  3-5
中文摘要  5-8
英文摘要  8-11
前言  11-12
文献回顾  12-42
正文  42-71
  实验一、大鼠第一、二磨牙牙胚成釉器牙乳头发育的组织学观察  42-47
    1.材料和方法  42-43
    2.结果  43-44
    3.讨论  44-46
    参考文献  46-47
  实验二、大鼠磨牙成釉器与冠、根部牙乳头组织重组体内移植实验  47-58
    1.技术路线  47-48
    2.材料和方法  48-50
    3.结果  50-52
    4.讨论  52-55
    参考文献  55-58
  实验三、大鼠磨牙成釉器与根部牙乳头细胞重组体内移植实验  58-65
    1.技术路线  58
    2.材料和方法  58-61
    3.结果  61-62
    4.讨论  62-64
    参考文献  64-65
  实验四、大鼠磨牙根部牙乳头细胞对成釉器细胞釉基质蛋白表达的影响  65-71
    1.材料与方法  65-68
    2.结果  68-69
    3.讨论  69
    参考文献  69-71
全文小结  71-72
附图  72-76
致谢  76-77
个人简历  77

大鼠磨牙成釉器与牙乳头相互作用的研究

内容摘要

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