学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

锈凹螺褐藻胶裂解酶的酶学特性及褐藻胶寡糖的活性研究

作　者: 孙丽萍
导　师: 许加超；薛长湖
学　校: 中国海洋大学
专　业: 水产品加工与贮藏
关键词: 褐藻胶裂解酶褐藻胶寡糖自由基清除抗氧化
分类号: TS201
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
下　载: 203次
引　用: 2次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本文对褐藻胶裂解酶在国内外的研究与进展和褐藻胶寡糖的的活性进行了综述，阐明了褐藻胶裂解酶和褐藻胶寡糖的研究对国民经济的发展所起的重大作用。实验从来源于海洋的食藻性锈凹螺（Chlorostoma rustica）的消化腺中分离纯化出一种褐藻胶裂解酶（Alginate Lyase），通过对其分离纯化与制备工艺的探讨，理化性质和催化动力学的研究，获得了该褐藻胶裂解酶的各项性能参数等有价值的信息，为今后进一步开展该酶的研究与改造、生产与应用奠定理论基础。在此基础上利用此酶裂解褐藻胶得到褐藻胶寡糖，并对褐藻胶寡糖的活性进行了研究。本文采用硫酸铵沉淀、离心超滤、DEAE-Sephadex A25、Sephadex G-100和Sephacryl S-300 HR柱层析等方法从锈凹螺（Chlorostoma rustica）消化腺中分离纯化出褐藻胶裂解酶（Alginate Lyase），得到电泳纯酶制品，此褐藻胶裂解酶的分子量为28KD，反应的最适温度为40℃，具有热不稳定性，最适pH为7.0；Mn²⁺，Co²⁺和Cd²⁺对此褐藻胶裂解酶活性具有明显的抑制作用，而Mg²⁺，Zn²⁺，Na⁺和K⁺则具有促进作用；采用透明圈法和底物法验证了此裂解酶对聚甘露糖醛酸和聚古洛糖醛酸的特异性，此酶对聚古罗糖醛酸（Polyguluronate，PG）有特异性。利用膜分离技术对酶解产物进行分离得到了分子量不同的3中寡糖Ⅰ（MW＜1000），Ⅱ（1000＜MW＜6000）和Ⅲ（6000＜MW＜10000）。利用P6对褐藻胶寡糖Ⅲ进行进一步的纯化，并利用TLC和HPLC对酶解工艺和分离纯化进行快速的检测。采用化学发光法和大肠杆菌法研究了它们对O₂^·-、OH和次氯酸三种自由基的清除作用，采用Fe²⁺诱发卵黄蛋白PUFA过氧化体系研究了寡糖对抗脂质过氧化的效果。褐藻胶寡糖Ⅰ，Ⅱ和Ⅲ对3种自由基均有较好的清除作用，而且清除活性随糖浓度的增加而加强。在O₂^·-体系中，褐藻胶寡糖Ⅰ清除效果要好于Vc，IC₅₀锈l‘，I螺褐藻胶裂解酶的酶学特性及褐藻胶寡糖的活性研究为8林g/mL。在OH和清除次氯酸自由基体系中，寡糖I和H对oH的清除效果比寡糖111显著的多。在抗脂质氧化体系中，三种不同分子量的褐藻胶寡糖，I、11和111的1 es。值分别为0 .1 4mg/mL、0.1 lmg/mL和0.09mg/mL。脂质过氧化物的抑制效果和对上述三种自由基的抑制效果相反。实验表明褐藻胶寡糖在四种体系中均有很好的清除作用，分子量大小对褐藻胶清除自由基的活性有显著影响。

全文目录

摘要  6-10
0 前言  10-27
1 锈凹螺褐藻胶裂解酶的分离纯化及性质研究  27-40
  1.1 材料和仪器  27-28
    1.1.1 原料  27
    1.1.2 试剂  27
    1.1.3 仪器  27-28
  1.2 方法  28-31
    1.2.1 酶活性分析  28-29
    1.2.2 蛋白质含量的测定  29
    1.2.3 褐藻胶裂解酶的制备  29
    1.2.4 抑制剂对蛋白酶活性的影响  29-30
    1.2.5 金属离子对酶的激活或抑制作用  30
    1.2.6 褐藻胶裂解酶的酶动力学方程  30
    1.2.7 高甘露糖醛酸和高古罗糖醛酸组分制备  30
    1.2.8 M／G比值的测定  30
    1.2.9 酶对底物的特异性分析  30
    1.2.10 褐藻胶裂解酶纯度和相对分子质量的测定  30-31
  1.3 结果与讨论  31-39
    1.3.1 活力的测定  31-33
    1.3.2 酶的分离纯化  33-34
    1.3.3 褐藻胶裂解酶酶学性质分析  34-36
    1.3.4 米氏常数的测定  36-37
    1.3.5 酶对底物特异性的分析  37-39
  1.4 小结  39-40
2 褐藻胶寡糖的制备  40-52
  2.1 材料和仪器  40-41
    2.1.1 原料与试剂  40
    2.1.2 仪器  40-41
  2.2 实验方法  41-42
    2.2.1 褐藻胶寡糖的制备  41
    2.2.2 糖的定量测定方法  41-42
    2.2.3 褐藻胶寡糖的TLC分析  42
    2.2.4 褐藻胶寡糖的HPLC分析  42
  2.3 结果与讨论  42-52
    2.3.1 褐藻胶裂解酶降解褐藻胶  42-46
    2.3.2 褐藻胶寡糖的分离  46-47
    2.3.3 褐藻胶寡糖的HPLC分析  47-52
3 褐藻胶寡糖的抗氧化活性  52-61
  3.1 材料和仪器  52-53
    3.1.1 材料  52-53
    3.1.2 试剂  53
    3.1.3 仪器  53
  3.2 方法  53-55
    3.2.1 褐藻胶寡糖的制备  53
    3.2.2 试剂的配制方法  53-54
    3.2.3 OH和O_2~(?)发光体系  54
    3.2.4 HOCl／OCl~-对大肠杆菌的杀伤作用  54-55
    3.2.5 褐藻胶寡糖对HOCl／OCl~-的清除作用  55
    3.2.6 褐藻胶寡糖抗脂质过氧化的能力的测定  55
  3.3 结果  55-59
    3.3.1 褐藻胶寡糖Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ对O_2~(?)的抑制作用  55-56
    3.3.2 褐藻胶寡糖Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ对.OH抑制作用  56-57
    3.3.3 HOCl／OCl~-对大肠杆菌的杀伤作用  57
    3.3.4 褐藻胶寡糖Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ对HOCl／OCl~-杀伤大肠杆菌的抑制作用  57-58
    3.3.5 褐藻胶寡糖抑制脂质过氧化的效果  58-59
  3.4 讨论  59-61
附图  61-63
参考文献  63-72
致谢  72

锈凹螺褐藻胶裂解酶的酶学特性及褐藻胶寡糖的活性研究

内容摘要

全文目录

相似论文