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酒蒸黄连炮制工艺及质量评价研究

作　者: 郑海杰
导　师: 张艺；赖先荣
学　校: 成都中医药大学
专　业: 药物化学
关键词: 酒蒸黄连炮制工艺高效液相色谱胰岛素抵抗质量评价生物碱
分类号: R283
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

黄连始载于《神农本草经》,列为上品,具有清热燥湿、泻火解毒的功效。根据中医临床辨证施治的需要,具有酒炒、姜炒、吴茱萸制、醋炙等多种炮制方法。自《名医别录》起,历代本草均有黄连治疗消渴病的记载,酒蒸黄连长于治消渴,明代李时珍《本草纲目》谓“治消渴,用酒蒸黄连”。本文以酒蒸黄连治疗“消渴病”为切入点,采用多成分分析相结合的研究方法,从整体上对酒蒸黄连改善胰岛素抵抗(IR)的药效物质基础、炮制工艺和质量控制方法进行研究。目的：探索酒蒸黄连改善IR效应的活性成分,筛选酒蒸黄连的最佳炮制工艺,并建立针对性的酒蒸黄连质量控制方法。方法：1、采用HPLC法建立同时测定酒蒸黄连及其它炮制品中6种生物碱的含量方法,并分别建立酒蒸黄连及其它炮制品的HPLC指纹图谱,以及酒蒸黄连的体内血清指纹图谱。2、采用U*6(64)均匀设计表,以改善3T3-L1脂肪细胞IR模型的葡萄糖利用率为指标,筛选酒蒸黄连最佳炮制工艺。并采用多元回归数理统计方法,分析黄连炮制品化学指纹图谱与改善IR效应的相关性,分析酒蒸黄连血清药物化学研究中的入血成分。以酒蒸黄连改善IR效应主要生物碱含量为指标筛选其最佳炮制工艺。3、建立同时测定酒蒸黄连的6种生物碱含量的新方法,并参考《中国药典》2010年版第一部黄连项下的方法,建立其薄层鉴别方法,并完成相应检查项的内容(水分、灰分、浸出物),初步建立酒蒸黄连的质量控制方法。结果：1、建立了黄连炮制品的HPLC指纹图谱,共标定了12个色谱峰,确定7-12号色谱峰分别为：盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱,各炮制品相似度和夹角余弦均大于0.9,但欧氏距离存在差异,主成分投影分析可将酒蒸黄连分类在一起。建立了黄连炮制品中6种生物碱的含量测定方法,6种生物碱的线性关系良好(r>0.999),加样回收率在95%-105%之间,RSD<2%,主成分投影分析可以将酒蒸黄连分类在一起,酒蒸黄连主成分得分最高为0.9412,单因素方差分析发现盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱和盐酸小檗碱是酒蒸黄连与饮片和其它炮制品存在差异性的成分。建立了酒蒸黄连的血清指纹图谱,通过与混合对照品色谱图对照,鉴定出峰4-7分别是盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱。2、以改善3T3-L1脂肪细胞IR模型的葡萄糖利用率为指标,均匀设计筛选结果为：黄酒20%,闷润2小时,蒸制8小时和；多元回归分析结果表明：盐酸药根碱,盐酸非洲防己碱,盐酸表小檗碱,盐酸小檗碱与IR模型的葡萄利用率密切相关；以可能的药效物质基础的总含量为指标,均匀设计筛选最佳炮制工艺结果为：黄酒20%,闷润2小时,蒸制8小时。3、建立了酒蒸黄连的薄层鉴别方法,测定了其6种生物碱的含量以及其水分、灰分、浸出物的含量。结论：1、采用HPLC法建立同时测定黄连炮制品中6种生物碱含量方法和指纹图谱,可用于黄连炮制品的质量控制。黄连炮制品间的化学成分存在差异,其差异性成分是盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱和盐酸小檗碱。2、初步筛选出了酒蒸黄连的最佳炮制工艺,建立的酒蒸黄连新的的质量控制方法,为其质量控制和临床应用提供了依据和保障。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-9
中英文缩写词对照表  9-10
引言  10-15
  1 该领域内存在和亟待解决的问题  12
  2. 研究思路  12-15
第一章黄连不同炮制品化学成分分析  15-62
  1. 黄连不同炮制品中6种生物碱的HPLC含量测定研究  15-41
    1.1 试验仪器、试剂与试药  15-16
    1.2 方法与结果  16-29
    1.3 数据分析  29-39
    1.4 小结  39-41
  2. 黄连不同炮制品体外化学指纹图谱研究  41-55
    2.1 试验仪器、试剂与试药  41
    2.2 方法与结果  41-53
    2.3 不同黄连炮制品HPLC图谱的比较分析  53-55
    2.4 小结  55
  3. 洒蒸黄连血清指纹图谱研究  55-62
    3.1 仪器、试剂与材料  55-56
    3.2 实验样品的制备  56-59
    3.3 血清色谱指纹图谱的测定  59-60
    3.4 小结  60-62
第二章酒蒸黄连炮制工艺研究  62-77
  1. 生物效应筛选酒蒸黄连炮制工艺研究  63-68
    1.1 仪器与试剂  63
    1.2 细胞株  63
    1.3 受试样品  63-64
    1.4 研究方法  64
    1.5 统计学处理  64-66
    1.6 不同炮制工艺酒蒸黄连改善IR活性测定  66-68
    1.7 小结  68
  2. 黄连炮制品改善IR药效物质基础初步研究  68-73
    2.1 化学指纹图谱共有峰的归属  68-69
    2.2 化学指纹图谱与改善IR生物效应相关性分析  69-72
    2.3 小结  72-73
  3. 生物碱含量筛选酒蒸黄连的炮制工艺研究  73-77
    3.1 试验仪器、试剂与试药  73
    3.2 方法与结果  73-74
    3.3 数据分析及验证试验  74-75
    3.4 小结  75-77
第三章酒蒸黄连饮片质量控制初步研究  77-86
  1. 酒蒸黄连饮片中生物碱的TLC鉴别研究  77-80
    1.1 仪器与试药  77
    1.2 实验方法  77-79
    1.3 酒蒸黄连的薄层色谱鉴别结果  79
    1.4 小结  79-80
  2. 酒蒸黄连饮片检查项研究  80-83
    2.1 水分测定  80
    2.2 灰分测定  80-82
    2.3 浸出物含量测定  82-83
    2.4 小结  83
  3. 酒蒸黄连饮片中6种生物碱的HPLC含量测定研究  83-86
    3.1 仪器、试剂与试药  83-84
    3.2 方法与结果  84-85
    3.3 小结  85-86
第四章总结与讨论  86-92
  1. 总结  86-88
    1.1 黄连不同炮制品化学成分分析  86
    1.2 酒蒸黄连炮制工艺的研究  86-87
    1.3 酒蒸黄连饮片质量控制方法的研究  87-88
    1.4 创新与特色  88
  2. 讨论  88-92
    2.1 研究对象  88-89
    2.2 研究方法与结果  89-91
    2.3 不足与展望  91-92
参考文献  92-95
综述黄连炮制品研究概况  95-101
  参考文献  99-101
附图  101-110
致谢  110-111
在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果  111-112

酒蒸黄连炮制工艺及质量评价研究

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