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兔髂动脉磁化及非磁化支架术后基质金属蛋白酶的变化

作　者: 郭新红
导　师: 贾国良
学　校: 中国人民解放军第四军医大学
专　业: 内科学
关键词: 磁化支架非磁化支架血管平滑肌细胞增殖迁移细胞外基质基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶组织型抑制剂超微结构兔内膜增生支架置入术
分类号: R541.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

一．背景和目的冠状动脉内支架置入术已成为一种常规的冠心病介入疗法，但RS率仍有10％—30％，严重影响了该技术的远期疗效。RS其有关发病机理尚不清楚。目前认为与血栓形成、内膜增生、ECM大量生成、弹性回缩、内皮细胞及平滑肌细胞的凋亡、氧化应激及不利的动脉重建等因素有关。研究认为损伤后过度修复是关键。内膜损伤后，一系列的因子异常分泌等，促使VSMC增植、迁移及ECM异常分泌。ECM是新生内膜的主要成分，也是参与血管重塑的主要因素。MMPs作为ECM代谢的重要基质降解酶，在其中起着不容忽视的作用。在大鼠、兔及猪的动脉球囊损伤后模型上早期均见MMP-2、MMP-9表达增高，提示它们可能在VSMC的迁移、新生内模形成及重塑方面起重要作用。实验及临床研究发现支架置入术较球囊成形术后新生内膜面积约大两倍。国外研究显示支架置入术较球囊成形术产生更强且持久的MMP-2活化及MMP-9的表达。说明MMPs，特别是MMP-2、MMP-9在动脉损伤细胞向内膜迁移，ECM降解过程中起重要作用。研究表明，磁场具有广泛的生物学效应，可影响培养的细胞基因的转录和翻译，改变细胞跨膜信号的转导。促进内皮功能恢复，抑制SMC增殖。对于损伤性病变，磁场具有促进组织修复的作用。经磁场作用的酶，大都有增第四军医大学硕士学位论文强活性的倾向。鉴于磁场广泛的生物学效应，我院研制开发了一种新型冠状动脉内支架－磁化支架。经动物实验和I期临床实验证实与非磁化支架相比具有更好的临床效果，显著减少了支架置入术后RS和其它冠脉事件的发生。但其作用机制尚不清楚。我们设想磁化支架防治再狭窄的机制可能与降低 MMPs的活性和／或调整 MMP及 TIMP之间量的失衡有关。本研究的目的是探讨磁化支架及非磁化支架置入后MMPS的变化，为磁化支架用于临床提供理论依据．二．方法与内容利用透射电镜比较观察MS及NMS置入术后兔骸动脉超微结构变化。采用形态学分析、Western Blot、酶谱法及RT－PCR技术，观察了 BA、MS及 NMS置入术后兔骸动脉 MMP－2、MMP－9、TIMP－1及 TIMP－2的变化。三．结果与结论门）术后 12周光镜检查发现，MS组骼动脉新生内膜 VSMC的增生程度明显低于NMS组，P＜0．of。电镜检查，术后7天，NMS组较MS组可见较多从外膜向中膜及内膜迁移的肌纤维母细胞，中膜及内膜大量以合成型为主的 VSMC，ECM以胶原及弹性纤维为主。30天时肥组内膜下VSMC己转化为收缩型，mM较少，以胶原及弹性纤维为主：而S内膜下VSMC仍为典型合成型表现，周围大量ECM，以糖氨多糖及糖蛋白为主。（2）明胶酶谱示一周、四周时，NMS组MMP－2酶原及活性均较BA组及 MS组明显增高（P＜0．05），但其峰值均出现在四周时。12周时NMS、MS组 MMP－2酶原形式略高于伪手术组，BA组MMP－2酶原及活性形式均降至伪手术组以下。各组均可见MMP－9酶原形式，其峰值均出现在一周时。在各组一周、四周、十H周呈渐降趋势。一周时，MMP－9酶原形式删S组地S组＞BA组（P（0．05）。NMS组一周时偶可见MMP－9活性形式。4及12周时未见MMP－9活形性形式表达。（3）Western印迹结果显示，MMP－2、TIMP－l及TIMP－2术后各组均有表达，MMP－9在伪手术组、BA组术后一周时未见表达，而NMS组明显高于MS组 4 第四军医大学硕士学位论文一b州．05卜十二周时各组均未见表达。MMP七术后一周时，NMS组皿S组）BA组…m．05厂BA组及NMS组MMP《蛋白表达高峰出现在4周时，而MS组呈逐渐升高趋势，高峰出现在第十H周时。各时间点NMS组灰度值均大于BA组，仅第十二周时MS组灰度值大于NMS组。TIMP－l蛋白表达，一周时NMS组明显高于MS及BA组（P＜0．05），四周时MS组＞NMS组＊A组（P＜0．05），十二周时NMS及BA组均降至伪手术组水平，MS组仍明显升高。TIMP叶蛋白表达峰值NMS及MS组均出现在四周时，BA组出现在十二周时。TIMP－2蛋白表达，一周时NMS组略高于伪手术组、MS组及BA组；四周时BA组略高于伪手术组及MS组，此两组均明显高于NMS组bm．05人十H周时，MS组明显高于伪手术组及BA组，此两组均明显高于NMS组b0．05厂一、四、＋H周时，NMS组 MMPZ／TIMPZ灰度比值较队组及敝组均有增高，但四、十二周时增高明显k狈．05人其峰值均出现在四周时。（4）伪手术组、BAMS及 NMS组均有 MMP－2、hP－9、TIMP－1及 TIMP－2 mRNA 的表达。术后一周各组MMP乃明显升高，NMS组明显高于肥及邵组b狈．05入三个月时仍维持在较高水平，但组间无明显差别。术后各组MMP－2逐渐升高，其中hrys组均略高于BA组，但组间无明显差别。TIMP－1于术后一周各组明显升高，一月时各组仍维持在高水平。三月后均有所下降，但仍未降至伪手术组水平。在各时间点NMS组略高于MS组，MS组略高于BA组，组间无明显差异。TIMP七术后一周时BA及MS组略升高，NMS组明显升高bm

全文目录

目录  4-5
英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-9
英文摘要  9-14
前言  14-16
文献回顾  16-48
  (一) 基质金属蛋白酶与心血管疾病  16-35
  (二) 磁场的生物效应及对心血管系统作用的研究进展  35-48
实验部分: 兔髂动脉磁化及非磁化支架术后基质金属蛋白酶的变化  48-74
  材料与方法  48-57
  结果  57-65
  讨论  65-73
  结论  73-74
附图  74-77
参考文献  77-84
致谢  84

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