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Tca8113-4-1BBL细胞联合CD28单抗在口腔鳞癌免疫中的作用

作　者: 张淼
导　师: 杨宏宇
学　校: 汕头大学
专　业: 口腔颌面外科
关键词: 4-1BBL CD28单克隆抗体 TCV-4-1BBL瘤苗抗肿瘤免疫细胞毒性T细胞
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的在细胞水平,研究口腔癌瘤苗TCV-4-1BBL联合CD28单克隆抗体(CD28 mAb)诱导T淋巴细胞抗肿瘤活性的能力。方法1.建立稳定表达4-1BBL克隆细胞株：通过脂质体法将真核载体pEGFP-4-1BBL转染人口腔鳞癌细胞Tca8113,经G418(400μg/ml)筛选及有限稀释后获得稳定高表达4-1BBL克隆细胞株Tca8113-4-1BBL,分别用RT-PCR和Western blot检测转染细胞中4-1BBL mRNA和蛋白的表达。2.制备瘤苗：将转染与未转染4-1BBL基因的Tca8113细胞用丝裂霉素C (MMC)处理后,制成肿瘤细胞瘤苗,分别命名TCV-4-1BBL、TCV-Tca8113。3. TCV-4-1BBL瘤苗联合CD28 mAb诱导抗肿瘤活性的能力：TCV-4-1BBL联合CD28 mAb与经体外CD3单克隆抗体(CD3 mAb)诱导的人外周血T淋巴细胞共同培养,实验分四组,①Tca8113组：T淋巴细胞+TCV-Tca8113;②Tca8113+CD3 mAb组：T淋巴细胞+CD3 mAb+ TCV-Tca8113;③Tca8113-4-1BBL+CD3 mAb组：T淋巴细胞+CD3 mAb+TCV-4-1BBL;④Tca8113-4-1BBL +CD3 mAb组+CD28 mAb:T淋巴细胞+CD3 mAb+TCV-4-1BBL+CD28 mAb。各实验组培养72小时后,台盼蓝染色计数T细胞、用Cell Counting Kit-8 (CCK-8)测细胞毒性T细胞(CTL)杀伤活性,ELISA法检测细胞因子IL-2、IFN-γ的分泌。结果1.荧光显微镜下观测到转染了pEGFP-4-1BBL的Tca8113细胞(Tca8113-4-1BBL)绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR、western blot在mRNA和蛋白水平检测到4-1BBL表达。2.72h后台盼蓝染色计数上述混合培养的T细胞,④组1.78±0.16,高于①组0.917±0.12,②组1.01±0.14及③组1.38±0.15,P<0.05,促进T细胞的增殖。3.72h后测CTL的杀伤活性：④组59.2±5.1,高于②组25.7±3.5及③组38.9±3.4,P<0.05,促进T细胞的活化。4.72h后各组IL-2的分泌：④组881.2131±78,显著高于①组56.1619±13,②组176.4235±33,③组526.1235±67,P<0.05,促进IL-2分泌。5.72h后各组IFN-γ的分泌：④组402.81±34高于其他各组(②组(69.83±13),③组246.87±24,①组37.85±11),促进IFN-γ的分泌。结论pEGFP/neo-4-1BBL真核表达载体在Tca8113细胞中获得稳定表达,口腔癌瘤苗Tca8113-4-lBBL构建成功。在细胞水平显示,TCV-4-1BBL瘤苗联合CD28 mAb,能增强T细胞抗肿瘤免疫功能,促进T细胞增殖、活化,促进IL-2、IFN-γ分泌可能是其机制之一。

全文目录

中文摘要  3-4
英文摘要  4-6
英文缩略语  6-8
目录  8-9
前言  9-11
正文  11-36
  材料与方法  11-23
  结果  23-30
  讨论  30-33
  结论  33-34
  参考文献  34-36
个人简历  36-37
致谢  37-38
综述及参考文献  38-43

Tca8113-4-1BBL细胞联合CD28单抗在口腔鳞癌免疫中的作用

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