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mTERT启动子驱动的m4-1BBL基因靶向免疫治疗小鼠肝细胞肝癌的体内实验研究
作 者: 邢迎清
导 师: 吴浩荣
学 校: 苏州大学
专 业: 普通外科学
关键词: 肝细胞肝癌 腺病毒 端粒酶逆转绿酶启动子 4-1BBL
分类号: R735.7
类 型: 硕士论文
年 份: 2009年
下 载: 39次
引 用: 0次
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内容摘要
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目的:构建携带mTERT启动子和m4-1BBL基因的重组腺病毒,为探讨治疗肝细胞肝癌的方法提供实验基础。观察mTERT启动子驱动的m4-1BBL基因对小鼠体内肿瘤的生长的抑制作用,探讨其治疗潜力。方法:应用细菌内同源重组法构建重组腺病毒载体质粒pAd-mTERT -promoter-m4-1BBL,我们将得到的重组腺病毒载体质粒pAd-mTERT promoter- m4-1BBL经脂质体转染293A细胞,获得重组腺病毒。同样方法得到空载体rAd病毒。我们用rAd-mTERT promoter-m4-1BBL、rAd感染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6;用RT-PCR检测转染重组腺病毒后肿瘤细胞中m4-1BBL和mTERT promoter基因的表达情况。建立C57BL/6小鼠皮下移植瘤模型。我们观察8周,测定肿瘤的体积、重量、抑瘤效果。免疫组化检测目的基因的表达情况。结果:成功构建mTERT启动子和m4-1BBL基因的重组腺病毒rAd- mTERT- promoter-m4-1BBL,病毒滴度1×1010pfu/ml。满足体内外实验的需要。构建的重组腺病毒rAd-mTERT promoter-m4-1BBL能够高效感染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6,感染后能使小鼠的肿瘤生长减慢,CD8+细胞表达增强,荷瘤小鼠生存期延长。结论:mTERT启动子驱动的m4-1BBL基因可明显抑制小鼠肝细胞肝癌的生长,促进肝癌细胞凋亡,延长荷瘤小鼠的生存期,有良好的靶向免疫治疗效果。
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全文目录
中文摘要 3-4
Abstract 4-7
研究背景 7-10
第一部分 带有目的基因的腺病毒载体的包装与扩增 10-21
1. 材料与方法 10-15
2. 结果 15
3. 讨论 15-21
第二部分 转基因小鼠肝癌细胞株 Hepa 1-6 细胞在同源 小鼠体内肿瘤建立的试验 21-33
1. 材料与方法 21-27
2. 结果 27-30
3. 讨论 30-33
全文结论 33-34
参考文献 34-40
综述一 40-46
参考文献 44-46
综述二 46-55
参考文献 52-55
附图 55-59
缩略词表 59-60
攻读学位期间公开发表的论文 60-61
致谢 61-62
详细摘要 62-64
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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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