学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

产前筛查及多重实时荧光定量PCR快速分子诊断非整倍体技术的建立

作　者: 眭建忠
导　师: 孙筱放
学　校: 广州医学院
专　业: 妇产科学
关键词: 唐氏综合征爱德华综合征产前筛查实时荧光定量聚合酶链反应快速诊断
分类号: R714.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 106次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

一、目的1.探讨国外唐氏筛查软件在中国人群应用的可行性。2.应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术,建立多重实时荧光定量PCR快速诊断唐氏及爱德华综合征技术。二、方法应用时间分辨荧光免疫法检测孕早期(11～13+6周)1517例孕妇血清的妊娠相关血浆蛋白-A (Pregnancy-associated plasma protein,PAPP-A)、?-人绒毛膜促性腺激素(Beta-human chorionic gonadotropin,?-hCG),孕中期(14～20周)4858例孕妇血清的?-hCG及甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein,AFP),超声测量孕早期胎儿颈部半透明厚度(Nuchal translucency,NT),然后将孕早期检测数据输入英国胎儿医学基金会(FMF)提供的The First Trimester Screening Program, version 2.2软件进行风险评估,将孕中期检测数据输入PerkinElmer公司提供的LifeCycle软件进行风险评估。采用多重实时荧光定量PCR技术,设计21、18号染色体上的APP及TYMS基因相应的引物和探针在同一管中作为相互内参照基因同时扩增,对36例外周血的正常核型样本(A组)、16例羊水的正常核型样本(B组)、21例唐氏综合征(C组)及6例爱德华综合征样本(D组)进行检测,对4组样本△CT值进行统计学分析,建立正常核型样本△CT值的参考范围,再利用已建立的方法对182例临床未知样本进行检测。三、结果1.孕早期唐氏筛查1517例孕妇中,高风险孕妇40例,检出1例唐氏综合征,随访未发现漏诊,假阳性率为2.6%,检出率为100%;孕中期唐氏筛查4858例孕妇中,高风险孕妇209例,检出3例唐氏综合征和2例爱德华综合征,随访发现漏诊2例唐氏综合征,假阳性率为4.2%,检出率为71.4%。2. 1517例孕早期唐氏筛查与4858例孕中期唐氏筛查的假阳性率比较有统计学意义(P<0.05),因样本量较小,未对检出率作统计学分析。3. A,B,C,D四组样本△CT均值分别为-0.48土0.15,-0.49土0.12,-1.26土0.17和0.25士0.12。独立样本t检验:B组与A组间无统计学意义(P>0.05);C组与A组、D组与A组间有统计学意义(P<0.01),且无交叉重叠。多重实时荧光定量PCR能有效区分唐氏、爱德华综合征和正常核型样本,与染色体核型分析结果高度一致。4.建立了本实验室正常核型样本的△CT值参考范围: -0.93 ~ -0.03( Mean土3 SD),检测182例临床样本提示该技术的灵敏度为100%,特异性为98.3%。四、结论1.引进国外唐氏筛查软件对中国人种孕妇开展产前筛查,对预防唐氏及爱德华综合征患儿的出生有重大意义。2.英国胎儿医学基金会(FMF)的孕早期唐氏筛查风险评估软件假阳性率低,避免了更多孕妇做侵入性穿刺,可减少胎儿流产。3.创建了一种简单、快速、低成本、通量大、具有临床应用价值的产前快速分子诊断唐氏及爱德华综合征技术,但还需进一步提高该方法的特异性。4.结合孕早期唐氏筛查和快速分子诊断技术,可对高风险孕妇做出早期诊断早期干预,值得临床应用推广。

全文目录

英汉简略词索引  3-4
中文摘要  4-7
Abstract  7-10
第一部分唐氏综合征筛查的研究  10-22
  前言  10-12
  材料与方法  12-14
  结果  14-19
  讨论  19-22
第二部分多重实时荧光定量PCR 快速分子诊断非整倍体技术的建立  22-51
  前言  22-26
  材料与方法  26-33
  结果  33-46
  讨论  46-51
全文小结  51-52
参考文献  52-55
综述  55-67
  参考文献  64-67
附页: 攻读硕士学位期间取得成果  67-68
致谢  68-69

产前筛查及多重实时荧光定量PCR快速分子诊断非整倍体技术的建立

内容摘要

全文目录

相似论文