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双耐盐基因载体的构建和小黑杨花粉植株组培系统的优化

作　者: 刘春华
导　师: 刘桂丰；姜静
学　校: 东北林业大学
专　业: 林木遗传育种学
关键词: 基因重组耐盐基因连接花粉植株
分类号: Q943.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
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内容摘要

重组DNA技术是基因工程中的一项十分重要的技术，本研究即利用这一技术，构建出了两个重组载体。用HindⅢ和EcoRⅠ双酶切pROKⅡ质粒，获得beta基因片段作为插入片段，用HindⅢ和EcoRⅠ双酶切A质粒作为载体片段，将插入片段与载体片段相连，即构建成含有beta和gus的双基因载体。用HindⅢ单酶切pGAH质粒作为载体片段，将beta基因片段作为插入片段与载体片段相连，即构建出双耐盐基因载体。采用单倍体植株作为遗传转化的材料会避免转基因过程中的嵌合体问题和子代分离问题。本研究以小黑杨花粉为外植体建立了适合转基因的组培再生系统。设置KT和2,4-D的不同浓度梯度组合实验，确定小黑杨花粉愈伤组织最适诱导培养基为MS+2～4mg/L 2,4-D+2mg／L KT；设置BA和NAA的不同浓度梯度，确定芽的最佳诱导培养基为MH+BA 0.1-0.5 mg／L+NAA 0.02-0.05 mg/L；组培苗生根的最佳培养基为1／2MS+0.2mg／L NAA。

全文目录

中文摘要  3-4
英文摘要  4-7
1 前言  7-17
  1．1 盐渍土对植物的危害  7-8
    1．1．1 渗透作用  7
    1．1．2 营养作用  7-8
    1．1．3 离子毒害作用  8
  1．2 植物的抗盐机理  8-9
    1．2．1 植物的避盐机理  8-9
    1．2．2 植物的耐盐机制  9
  1．3 植物耐盐基因工程研究进展  9-14
    1．3．1 小分子渗透调节物质的代谢工程  10-13
    1．3．2 大分子蛋白类的渗透调节研究进展  13-14
  1．4 单倍体材料的诱导及其在生物工程中的应用  14-16
    1．4．1 杨树基因工程研究进展  14
    1．4．2 杨树单倍体植株研究的概况  14-15
    1．4．3 单倍体在遗传工程中的应用  15-16
  1．5 本研究的目的和意义  16-17
2 材料与方法  17-24
  2．1 实验试剂  17-18
  2．2 生化试剂  18
  2．3 实验材料  18
  2．4 实验方法  18-24
    2．4．1 gus基因耐盐基因betA的重组  18-21
    2．4．2 耐盐基因betA与codA重组  21-22
    2．4．3 小黑杨花粉植株组培系统的优化  22-24
3 结果与分析  24-37
  3．1 GUS基因与耐盐基因BETA的连接重组  24-28
    3．1．1 目的片段与载体片段的获得  24-26
    3．1．2 目的片段与载体片段的连接  26-27
    3．1．3重组子的检测  27-28
  3．2 耐盐基因BETA与CODA基因的重组  28-32
    3．2．1 目的片段与载体片段的获得  29
    3．2．2 目的片段与载体片段的连接  29-31
    3．2．3 重组质粒转化感受态细胞  31
    3．2．4 重组子的检测  31-32
  3．3 小黑杨花粉植株组培系统的优化  32-37
    3．3．1 接种量对愈伤组织诱导的的影响  32-33
    3．3．2 不同激素浓度对花粉愈伤组织诱导的影响  33
    3．3．3 不同的激素浓度对芽诱导的影响  33-34
    3．3．4 选择适宜的生根时间  34-35
    3．3．5 染色体数目的检测结果  35-37
4 讨论  37-40
  4．1 基因重组  37-38
  4．2 单倍体再生体系的建立  38-40
5 建议与展望  40-41
参考文献  41-45
附表  45-46
附图  46-47
致谢  47

双耐盐基因载体的构建和小黑杨花粉植株组培系统的优化

内容摘要

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