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牦牛肉产品的分子追溯研究

作　者: 何建文
导　师: 韩建林；罗玉柱
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 耗牛肉产品 Cytb基因三个特异SSR 牛种来源分子追溯
分类号: S823.85
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 46次
引　用: 1次
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内容摘要

为了建立牦牛、黄牛(包括瘤牛和普通牛)和水牛肉在线粒体和核基因水平上快速、准确的鉴定方法,用于牦牛肉产品的来源追溯和物种成分鉴别,以牦牛、黄牛、水牛肉和来源于10个不同厂家的牦牛肉产品作为研究材料,尝试并系统地比较了异硫氰酸胍法、酚-氯仿抽提法和试剂盒提取法提取DNA效果进行了比较分析,并采用Cyt b基因和三个特异性微卫星位点进行检测,主要获得以下研究结果：1.通过定量分析、凝胶电泳和PCR片段大小梯度扩增等手段对利用异硫氰酸胍法、酚-氯仿抽提法和试剂盒提取法提取的基因组DNA的数量和质量进行了比较。研究认为异硫氰酸胍法操作简便、快速、廉价,能从牦牛肉产品中提取到高质量的基因组DNA。2.在Cyt b基因(472 bp)区域发现牦牛、黄牛和水牛各自的特异性酶切位点：牦牛的酶切位点为GACGCNNNN/,酶切片段分别为220 bp和252 bp；普通牛的酶切位点为GGGCC/C,酶切片段分别为173 bp和299 bp；水牛的酶切位点为CCANNNN/NTGG,酶切片段分别为69 bp和403 bp,且没有交叉酶切现象,可用于混合牛肉产品的牛种来源的鉴别。3.通过对10个厂家的30袋牦牛肉产品的135份样品进行Cyt b基因片段的测序检测,发现其中有68条牦牛序列,仅占50.4%；另外有51条黄牛序列和16条水牛序列,占到了49.6%。说明黄牛肉、水牛肉掺杂到牦牛肉产品中的现象十分严重。4.通过研究发现,对于存在基因渗透的畜种,结合3个特异性微卫星位点检测的结果才能得到可靠的结论。

全文目录

摘要  6-7
Summary  7-8
第一部分文献综述  8-18
  第一章牦牛肉产品检测的研究进展  8-18
    1 牦牛肉产品的市场调查  8-9
    2 研究牦牛肉产品肉种来源的意义  9-10
    3 动物肉产品源性成分检测的方法  10-14
      3.1 以显微镜观察为基础的方法  10-11
      3.2 以检测蛋白质为基础的方法  11-12
      3.3 以检测DNA为基础的方法  12-14
    4 线粒体DNA标记在牛源性鉴别中的应用  14-16
    5 国内外动物产品分子追溯的研究进展  16-17
    6 本研究的内容和意义  17-18
第二部分试验研究  18-39
  第一章利用不同方法从牦牛肉产品中提取 #11基因组DNA效果的比较  18-25
    1 材料和方法  19-21
      1.1 实验材料  19-20
      1.2 DNA提取方法  20
      1.3 紫外分光光度计检测  20
      1.4 凝胶电泳检测  20
      1.5 PCR检测  20-21
    2 结果与分析  21-23
      2.1 定量分析结果  21-22
      2.2 凝胶电泳结果  22
      2.3 PCR检测的结果  22-23
    3 讨论  23-25
  第二章利用PCR-RFLP方法和三个特异性微卫星位点对牦牛肉产品的肉种来源进行抽样鉴别  25-39
    1 材料与方法  25-30
      1.1 材料  25-27
      1.2 方法  27-30
    2.结果和分析  30-35
      2.1 Cytb基因的检测分析结果  30-32
      2.2 牦牛、黄牛及水牛Cytb基因片段序列分析  32-34
      2.3 三个特异微卫星位点的检测分析  34-35
    3 讨论  35-37
      3.1 基因选择和特异酶切位点的选取  35
      3.2 牦牛肉产品检测分析  35-36
      3.3 真正牦牛肉源性的检测  36
      3.4 牦牛肉产品DNA的提取  36
      3.5 非牛源性物质的排除  36-37
    4 结论  37-39
致谢  39-40
参考文献  40-45
附录一试验相关溶液的配制  45-47
附录二论文相关材料  47-51
  作者简介  47-48
  导师简介  48-51

牦牛肉产品的分子追溯研究

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