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大鼠DRG加压培养细胞模型建立和持续压迫对DRG上TRPV4表达的影响

作　者: 王艳琴
导　师: 岳寿伟
学　校: 山东大学
专　业: 康复医学与理疗学
关键词: 背根神经节细胞模型机械刺激压力大鼠机械痛 TRPV4离子通道蛋白质印迹
分类号: R-332
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的：建立大鼠背根神经节(Dorsal root ganglion，DRG)细胞加压培养模型，观察在恒定压力下培养24h和48h的神经元形态和活性的变化，评价这种神经元加压培养模型的优缺点。方法：取新生Wistar大鼠腰背段全部DRG，将处理好的DRG神经元进行培养，根据受压时间，将神经元随机分为正常对照组、受压24h组、受压48h组，在80mmHg压力的密闭环境中培养相应时间后观察各组神经元在荧光显微镜和电镜下的形态学特点，并用MTT法分析各组神经元细胞生长活性的改变。结果：①荧光显微镜下观察加压培养组DRG神经元形态较正常未受压组五无明显差异。②超微结构示加压48h组和24h组神经元较正常组线粒体肿胀明显，粗面内质网缩短，变少，游离核糖体增多，部分核固缩，神经元代谢水平下降。③MTT法比较加压前、后各组神经元活性的差异无统计学意义。结论：加压培养未对DRG神经元活性产生显著影响，此模型可观察机械压力单一因素对神经元的影响，有望成为一种在亚细胞和分子水平研究机械压力对DRG神经元的影响的有效细胞模型。目的：建立大鼠背根神经节持续压迫模型，测定术后大鼠运动功能和机械痛阈的变化，观察背根神经节受压后组织形态学改变，测定受压不同时间后大鼠背根节上TRPV4通道蛋白的表达变化，探讨TRPV4离子通道在背根神经节受到持续压迫后产生疼痛的机制中所发挥的作用。方法：健康雄性Wistar大鼠63只，随机分为空白对照组(n=9)、假手术7天组(n=9)、假手术14天组(n=9)、假手术28天组(n=9)、手术7天组(n=9)、手术14天组(n=9)、手术28天组(n=9)。建立大鼠背根神经节持续压迫模型。测定手术后不同时期(1天、3天、5天、7天、9天、11天、13天、15天、17天、19天、21天、23天、25天及27天)动物运动功能和机械刺激痛阈阈值等神经行为学指标的变化情况。造模后7天、14天、28天取材，HE染色，光镜下观察背根神经节的组织形态学改变：采用Western-Blotting技术结合凝胶分析系统，分析压迫不同时间后，背根神经节上TRPV4通道蛋白表达的变化。结果：①手术组各时间段大鼠右后肢机械痛阈值的改变具有显著性差异，出现明显的痛觉过敏现象，空白对照组及各假手术组各时间段的机械痛阈值均无明显改变。②术后7天组的病理切片显示持续受压的背根神经节出现组织水肿，神经元空泡样变性，间质血管充血；术后14天时神经外膜和神经纤维水肿明显，神经元空泡样变性，核固缩，间质充血，局部少量炎细胞浸润；术后28天时神经元水肿明显减轻，局部纤维母细胞增生，神经内膜增厚。而空白对照组及各假手术组背根神经节病理改变不明显。③和相应假手术对照组相比，手术后7天、14天及28天的背根节上TRPV4通道蛋白的表达均明显高于其同时期假手术组。结论：建立大鼠背根神经节持续压迫模型，手术组损伤侧后肢出现机械痛觉过敏，受压背根节在急性期主要表现为炎症反应，慢性期表现为以纤维组织增生为主，在此模型基础上测定手术组背根节上TRPV4通道蛋白的表达水平随时间延长有增多的趋势，说明TRPV4通道可能与大鼠背根节受到持续压迫后异常痛觉的产生有关。

全文目录

符号说明  5-6
第一部分:大鼠背根神经节神经元加压培养细胞模型的建立  6-21
  中文摘要  6-7
  英文摘要  7-9
  前言  9-10
  材料与方法  10-13
  结果  13-14
  讨论  14-17
  结论  17-18
  附表及附图  18-20
  参考文献  20-21
第二部分:持续压迫对大鼠背根神经节上TRPV4通道蛋白表达的影响  21-48
  中文摘要  21-23
  英文摘要  23-25
  前言  25-27
  材料与方法  27-33
  结果  33-36
  讨论  36-41
  结论  41-42
  附表及附图  42-45
  参考文献  45-48
综述  48-57
致谢  57-58
攻读学位期间发表的文章  58-59
学位论文评阅及答辩情况表  59

大鼠DRG加压培养细胞模型建立和持续压迫对DRG上TRPV4表达的影响

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