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仔猪大肠杆菌病基因工程菌株GE-3的构建与免疫原性研究

作　者: 王卓
导　师: 宣华
学　校: 吉林大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 仔猪 ETEC K88ac-ST1-LTB 基因工程疫苗 免疫接种
分类号: S852.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 97次
引　用: 1次
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内容摘要


新生仔猪大肠杆菌性腹泻(Diarrhea in Neonatal Swine Caused by E.coli)俗称仔猪黄痢,是由特定血清型产肠毒素性大肠埃希氏菌(Enterotoxigenetic E.coli,ETEC)感染所引起的初生仔猪的一种急性、致死性传染病。主要发生于一周龄以内的仔猪,尤以1-3日龄最为多见,临床以腹泻、排黄色稀便为主要特征,发病率和死亡率均很高。在仔猪腹泻病病原中,约有40%的病例由ETEC引起,而在我国则约为35%。ETEC的毒力因子主要包括黏附素(adhesin)和肠毒素(enterotoxin,Ent)。许多学者先后证实,多数ETEC菌株带有K88、K99、987P和F41等黏附素,并产生ST/LT或ST和LT。具有K88菌毛的菌株通常产生ST和LT,而具有K99、987P、F41等菌毛和不具有菌毛的菌株通常只产生ST。本研究应用分子生物学技术,针对新生仔猪大肠杆菌性腹泻病原的主要致病因子K88ac、ST1、LTB克隆和连接,并于原核载体中得以表达。表达的K88ac-ST1-LTB融合蛋白能被K88ac抗体、ST1和LTB单克隆抗体识别,并使免疫小鼠和仔猪抵抗强毒C83902株的攻击。用重组PCR技术对ETEC C83902株ST1基因的抗原编码区进行了定点突变,然后将突变后的三个ST1突变基因进行了连接,并克隆至中间载体质粒pUC19中,构建成重组质粒pXST3。用重组PCR技术对ETEC C83902株K88ac基因和LTB基因的抗原编码区分别克隆至中间载体质粒pBluescriptII和表达载体pET-28b中,构建成重组质粒pXK88和pXLT。在构建了上述三个中间质粒之后,经酶切、连接、克隆,构建了重组表达质粒pXK88acST3LT5。将其转化至工程菌株BL21(DE3)构建了重组菌株GE-3,其表达的融合蛋白经检测能够被K88ac抗体、ST1和LTB单克隆抗体识别。用乳糖替代IPTG对重组菌株GE-3进行诱导对比试验和诱导条件试验,证明乳糖可以替代IPTG诱导该重组菌株表达。用重组菌株GE-3乳糖诱导表达的菌液制备疫苗2批,分别用小鼠和猪进行了安全性试验和免疫攻毒试验,结果,2批疫苗均安全、有效。

全文目录


内容提要  5-7
英文缩写词表  7-9
前言  9-11
第一篇 文献综述 新生仔猪大肠杆菌性腹泻病原（ETEC）致病因子研究进展  11-29
  1 菌毛(黏附素)  11-19
  2 肠毒素  19-28
  3 小结  28-29
第二篇 研究内容 仔猪大肠杆菌病基因工程菌株GE-3 的构建与免疫原性研究  29-56
  1 材料与方法  30-40
  2 结果  40-53
  3 讨论  53-55
  4 小结  55-56
结论  56-57
参考文献  57-68
中文摘要  68-71
英文摘要  71-74
致谢  74-75
导师简介  75-76
作者简介  76
硕士期间发表论文情况  76-77
CURRICULUM VITAE  77

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医基础科学 > 血清学
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