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重复序列标记用于鉴别病理混淆标本的研究

作　者: 陶汉杰
导　师: 马韵
学　校: 广西医科大学
专　业: 病理学
关键词: 混淆标本个体识别短串联重复
分类号: R446.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

研究目的:①筛选适用于鉴别病理混淆标本的目的基因;②建立检测目的基因的实验方法。研究方法:①收集60例结肠癌病人的手术切除标本及外周血标本,用改良的酚-氯仿抽提法提取外周血DNA,用改良的蛋白酶K消化、酚-氯仿抽提法提取相应病人的福尔马林固定、石蜡包埋组织DNA,分别对目的基因进行扩增,扩增产物用琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测;②对同一患者标本分别经福尔马林固定12、36、60 h,比较目的基因分别在它们中的PCR扩增结果;对同一石蜡包埋组织分别用蛋白酶K经37℃消化12h和56℃消化3h,再提取DNA进行扩增,比较不同消化条件下所提取DNA的PCR扩增结果。③改变PCR反应体系和反应条件,观察其对PCR扩增效果的影响。研究结果:①初步筛选出2个目的基因D1S80和vWA,受检外周血标本中D1S80和vWA的扩增成功率分别为100%(30/30例)和90%(27/30例),而在相对应的石蜡包埋组织中的扩增成功率分别为0(0/10例)和46.7%(14/30例),在组织DNA中,两位点扩增的总的成功率分别为0(0/45份标本)和29.7%(46/155份标本)。②组织标本分别经福尔马林固定12、36和60h后所提取的DNA,在vWA位点的扩增结果差别无显著意义(P值>0.05);用37℃消化12h和56℃消化3h两种条件提取石蜡包埋组织DNA,对vWA位点的PCR扩增结果差别亦无显著意义(P值>0.05);增加镁离子浓度可以提高vWA位点在石蜡包埋组织中的扩增效果。③消化道恶性肿瘤组织存在vWA位点的杂和性缺失,缺失率为21.4% (3/14例)。结论:①通过扩增不同标本组织中短串联重复序列并进行比较,在10~12h内,可以把经福尔马林固定的混淆标本区分开来;②采用一般方法从福尔马林固定组织中提取的DNA片断长度约在400bp左右,故应选择扩增长度较短的目的基因用于区分实验。在重复序列标记中,目的基因的扩增片段越小,在石蜡包埋组织中扩增的成功率就越高。vWA位点适用于病理科混淆标本的鉴定,但其扩增效率还有待于进一步提高。③vWA在消化道恶性肿瘤组织中存在一定突变率,可能导致鉴别错误。

全文目录

一、重复序列标记用于鉴别病理混淆标本的研究  3-31
  英汉缩略对照  3-4
  中文摘要  4-5
  英文摘要  5-7
  前言  7-8
  材料与方法  8-15
  结果  15-21
  讨论  21-27
  结论  27-28
  参考文献  28-31
二、病理科混淆标本鉴别方法的研究进展  31-42
  正文  31-39
  参考文献  39-42
三、致谢  42

重复序列标记用于鉴别病理混淆标本的研究

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