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QF-PCR扩增D18S53、D18S59及D18S4883个STR基因座产前诊断ES

作　者: 孙立娟
导　师: 张颖
学　校: 天津医科大学
专　业: 妇产科学
关键词: 产前诊断18三体综合征 短串联重复序列 定量荧光聚合酶链反应
分类号: R714.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的探讨应用定量荧光聚合酶链反应(Quantitative fluorescence polymerase chain reaction, QF-PCR)扩增D18S53、D18S59和D18S488 3个STR (Short tandem repeat, STR)基因座产前诊断18三体综合征(Edwards syndrome, ES)的可行性与可靠性,为建立一种快速、简便、准确并适合临床应用的产前诊断ES的方法提供实验依据。方法选择天津地区汉族无亲缘关系的产前诊断样本447例,其中绒毛组织69例,羊水细胞378例,所有样本均有染色体核型分析结果。提取基因组DNA后扩增D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座,ABI PRISM 377测序仪检测PCR扩增产物,用GeneScan 3.1软件分析结果。D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座的基因型分布采用χ2检验,验证是否符合Hardy-Weinberg平衡定律,并将所得数据通过PowerStatsV12软件进行统计分析,分别计算D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座的观察杂合度(Heterozygosity of observation, Ho)、多态信息量(Polymorphism information content, PIC)、个体识别率(Discrimination power,DP)、非父排除率(Probability of exclusion, PE)等群体遗传学数据。根据电泳图及峰图对447例样本进行产前诊断,并与细胞遗传学结果相比较,计算D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座产前诊断ES的敏感度和特异度。对表现为杂合子的正常核型个体、表现为杂合子及半杂合子的异常核型个体进行峰而积定量,计算峰而积比值,并进行统计学分析。结果1.D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座的基因型分布经χ2检验均符合Hardy-Weinberg平衡定律。2.447例产前诊断样本中,染色体核型正常438例,ES 8例,三倍体1例(因其含有3条18号染色体,本研究视为ES)。D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座分别诊断ES 7例、4例和5例,诊断的敏感度分别为77.78%(7/9)、44.44%(4/9)和55.56%(5/9),特异度均为100%(438/438)。D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座联合诊断,438例样本诊断为正常核型,9例诊断为ES,与细胞遗传学结果一致,无假阳性和假阴性。D18S53、D18S59和D18S4883个STR基因座联合诊断ES的敏感度为100%(9/9),特异度为100%(438/438)。QF-PCR的结果于取样后24-48h内获得。3.438例染色体核型正常的个体中,D18S53、D18S59和D18S4883个STR基因座上共1067个表现为杂合子,2个峰的峰面积比值介于0.50-1.76之间,x±s=1.06±0.21,95%的参考值范围为0.65≤峰面积比值≤1.47。9例ES中,D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座上共6个表现为半杂合子,2个峰的峰面积比值介于1.76-2.01之间,x±s=1.86±0.09,95%的参考值范围为1.68≤峰面积比值≤2.03；9例ES中,D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座上共16个表现为杂合子,3个峰的峰面积比值均约为1：l：l。结论1.天津地区汉族群体D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律,可用于ES的基因诊断和产前基因诊断。2.单独应用D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座诊断ES的敏感度分别为77.78%(7/9)、44.44%(4/9)和55.56%(5/9),特异度均为100%(438/438)。D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座联合诊断ES的敏感度和特异度均为100%。3.染色体核型正常的个体表现为杂合子时,2个峰的峰而积比值参考值范围为0.65≤峰面积比值≤1.47。染色体三体样本表现为半杂合子时,2个峰的峰面积比值的参考值范围为1.68≤峰面积比值≤2.03：三体样本表现为杂合子时,3个峰的峰面积比值约为1：1：1。4. QF-PCR技术可以快速、简便、准确地产前诊断ES,敏感度、特异度均较高,在临床上有广阔的应用前景。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-10
符号说明  10-11
前言  11-14
  研究现状、成果  11-13
  研究目的、方法  13-14
QF-PCR扩增D18S53、D18S59及D18S488 3个STR基因座产前诊断ES  14-49
  1 对象与方法  14-19
    1.1 研究对象  14
    1.2 实验材料  14
    1.3 主要试剂的配制  14-15
    1.4 主要仪器设备和分析软件  15
    1.5 试验方法  15-19
  2 结果  19-30
    2.1 基因组DNA的检测结果  19
    2.2 PCR扩增产物定性检测结果  19
    2.3 QF-PCR扩增产物检测结果  19
    2.4 D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座的遗传多态性  19-22
    2.5 D18S53、D18S59和D18S488 3个STR基因座产前诊断ES  22-28
    2.6 峰面积比值的统计  28-30
  3 讨论  30-49
    3.1 18三体综合征  30-31
    3.2 DS产前筛查  31-35
    3.3 STR基因座  35-36
    3.4 STR-QF-PCR产前诊断的原理  36-39
    3.5 STR-QF-PCR产前诊断的优势  39-41
    3.6 STR-QF-PCR产前诊断的不足  41-43
    3.7 QF-PCR能否代替染色体核型分析  43-44
    3.8 其它产前诊断方法  44-49
结论  49-50
参考文献  50-54
发表论文和参加科研情况说明  54-55
综述 叶酸代谢相关酶基因多态性与唐氏综合征  55-63
  综述参考文献  60-63
致谢  63

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中图分类: > 医药、卫生 > 妇产科学 > 产科学 > 胎儿
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