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猪链球菌2型的分离鉴定及PCR检测

作　者: 郝春燕
导　师: 王晶钰
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪链球菌分离鉴定荚膜多糖基因溶菌酶释放蛋白基因胞外因子基因聚合酶链式反应
分类号: S852.611
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

猪链球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)是猪链球菌病的重要病原体。猪链球菌病不仅感染猪,临床主要表现为淋巴脓肿、脑膜炎、关节炎、败血症及突发性死亡等,而且能引起相关从业人员严重感染甚至死亡。因此,猪链球菌2型是人畜共患病的一种重要病原体。本研究进行了该病原的细菌学分离鉴定、药敏试验,以及猪链球菌2型毒力因子PCR检测等,从而揭示了陕西省猪链球菌病的病原学特性,并且建立了该病的分子生物学检测方法。为了进行病原的微生物学鉴定,从陕西省A、B两个猪场送检的20份疑似链球菌病病死猪病料中分离到10株细菌,经过培养特性、染色特点、显微镜观察和生化试验,确定为猪链球菌。对分离到的10株猪链球菌进行了18种抗革兰氏阳性细菌的药物药敏试验,结果A猪场4株分离菌株对复达欣、多粘菌素、头孢噻吩高度敏感,但对青霉素、氨苄青霉素、红霉素、氟哌酸、环丙沙星以及阿莫西林表现出明显耐药性;B猪场6株分离菌株对头孢噻肟、复达欣、利福平、多粘菌素高度敏感,但对青霉素、氨苄青霉素、红霉素、复方新诺明、氟哌酸、环丙沙星有明显耐药性。所分离10株猪链球菌对小鼠均有较强致病性。在PCR检测中,依据猪链球菌2型荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)、溶菌酶释放蛋白(muramidase-released protein,MRP)和胞外因子(extracellular protein factor,EF)的基因分别设计了3对引物,对分离的10株猪链球菌进行PCR扩增,结果10株分离菌均扩增出CPS、MRP和EF基因,产物大小分别为450bp、532bp和269bp,与预期设计相符,表明陕西省A、B两猪场的链球菌病是由猪链球菌2型引起的。本研究为陕西省进一步诊断和控制猪链球菌病提供了微生物学和分子生物学依据。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-9
文献综述  9-16
  第一章猪链球菌病研究进展  9-16
    1.1 SS 病原学研究进展  9
    1.2 SS 流行病学研究进展  9-10
    1.3 SS 毒力因子研究进展  10-12
      1.3.1 荚膜多糖  10
      1.3.2 溶菌酶释放蛋白和胞外因子  10-11
      1.3.3 溶血素  11
      1.3.4 黏附素  11
      1.3.5 谷氨酸脱氢酶  11-12
      1.3.6 纤连蛋白和血纤蛋白原的结合蛋白  12
      1.3.7 其他  12
    1.4 SS 实验室诊断研究进展  12-14
      1.4.1 生化鉴定  12-13
      1.4.2 血清学鉴定  13
      1.4.3 PCR 技术  13-14
    1.5 SS 耐药性研究进展  14-15
    1.6 SS 防制研究进展  15
      1.6.1 药物治疗  15
      1.6.2 疫苗预防  15
    1.7 本研究的目的和意义  15-16
试验研究  16-29
  第二章猪链球菌2 型的分离鉴定及药敏试验  16-25
    2.1 材料和方法  16-18
      2.1.1 材料  16
      2.1.2 试验方法  16-18
    2.2 结果  18-23
      2.2.1 细菌分离鉴定  18-19
      2.2.2 生化试验  19-20
      2.2.3 药敏试验  20-23
      2.2.4 致病性试验  23
    2.3 讨论  23-24
    2.4 小结  24-25
  第三章猪链球菌2 型的PCR 检测  25-29
    3.1 材料  25
      3.1.1 菌株  25
      3.1.2 试剂  25
    3.2 方法  25-26
      3.2.1 引物  25-26
      3.2.2 模板DNA 的提取  26
      3.2.3 PCR 扩增  26
    3.3 结果  26-28
      3.3.1 定型鉴定  26-27
      3.3.2 毒力因子鉴定  27-28
    3.4 讨论  28
    3.5 小结  28-29
结论  29-30
参考文献  30-33
致谢  33-34
个人简介  34

猪链球菌2型的分离鉴定及PCR检测

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