学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

cHL H/RS及背景淋巴细胞BSAP表达与IgH基因重排检测

作　者: 周新华
导　师: 赵彤
学　校: 第一军医大学
专　业: 病理学
关键词: cHL H／RS细胞背景淋巴细胞 BSAP IgH 基回重排单细胞显微切割间接法原位PCR
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
下　载: 24次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma，HL)由于它的恶性肿瘤细胞—H／RS细胞一般只占肿瘤组织的极少部分(不到1％)，且散在分布在背景细胞间，因此对于H／RS细胞的来源和性质研究一直是人们探索的目标。1994年德国科隆大学Kūppers等发展了一种从冰冻组织切片上用显微操作仪挑取单个H／RS细胞的显微切割方法进行H／RS细胞基因分析后，人们对H／RS细胞来源的研究有了突破性的进展，多数支持B细胞来源。我们的前期研究也支持部分H／RS细胞为B细胞来源，但我们发现只有18.8％的H／RS细胞表达CD20，31.3％的HL检测到IgH基因重排克隆性条带。H／RS细胞周围有大量的背景细胞，克隆来自周围背景淋巴细胞还是来自H／RS细胞仍令人质疑。本研究将在以往研究的基础上，在国内率先把B细胞核反式作用因子—B细胞特异性激活蛋白(B-cell-specific activator protein，BSAP)应用于HL的研究，检测HL的BSAP表达，并采用石蜡刮片组织和微切割单细胞的基因分析、测序分析和间接原位PCR等方法，同步观察分析H／RS和背景淋巴细胞的IgH基因克隆相关性，从又一个新视角探究cHL的肿瘤性H／RS细胞克隆性及与背景淋巴细胞的关系。方法首先结合常规的CD30、CD15、CD20、CD45RO对33例HL进行BSAP免疫检测，比较H／RS细胞和背景淋巴细胞的蛋白表达情况。然后对33例cHL的石蜡刮片组织进行IgH基因重排检测，并对其中6例克隆性重排阳性的标本显微切割BSAP标记阳性的H／RS细胞和背景淋巴细胞，分别进行基因重排检测，分析两者克隆相关性。同时对3例有克隆单带的PCR产物进行测序，并标记成寡核苷酸探针，采用间接原位PCR方法对H／RS细胞和背景淋巴细胞进行原位IgH基因重排观测。结果 (1)33例cHL中，30／33(90.91％)H／RS细胞和33／33(100％)背景淋巴细胞BSAP表达阳性，而H／RS细胞10／33(30.30％)CD20阳性，1／33(3.03％)CD45RO阳性，31／33(93.94％)CD30阳性，25／33(75.75％)CD15阳性；(2)33例HL石蜡刮片组织中有16例(48.48％)出现IgH基因重排阳性，显微切割的19管H／RS细胞有14管(73.68％)扩增阳性，而12管背景淋巴细胞有2管(16.67％)扩增阳性；(3)测序分析周新华第一军医大学病理学教研室获得了一段免疫球蛋白重链可变区的重排片断；（4）原位PCR结果发现杂交的阳性颗粒不仅出现在探针来源的同一病例也出现在不同病例的HillS细胞核上，同时在部分周围背景淋巴细胞核上也见到阳性颗粒。结论（1）本研究在国内首次把BSAP应用于HL的检测，从蛋臼水平上为Hl；tS细胞的B细胞起源进一步提供了有力证据，升且有利于fIOtS细胞的辨认和与ALCL鉴别；（2）BSAP不同于CD20的细胞膜染色，它表达定位于核。本研究首次用BSAP标记染色后行显微切割，不仅保证了挑取的HOtS细胞在蛋白上表达为B细胞性，而且切割部定位在细胞核，使 DNA准确性得到了最大限度的保证；（3）采用寡克隆和克隆演化的标准判断重排结果，可提高lgH基回重排检出率：H 通过对石蝉刮片组织、显微切割细胞、PCR产物测序分析、原位PCR多方面的IgH基因重排检测，证明部分WRS细胞来源于B细胞，但可能存在不同克隆；（5）背景淋巳细胞部分出现克隆性重排，提示其并4「单纯反应性增生，是否为肿瘤细胞组成部分，仍需进一步测序证实。

全文目录

缩略语简表  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-13
第一部分 cHLH／RS和背景淋巴细胞BSAP的表达  13-19
  材料和方法  13-14
  结果  14-16
  讨论  16-19
第二部分 cHL石蜡刮片组织和显微切割H／RS和背景淋巴细胞的IgH基因重排检测  19-27
  材料和方法  19-22
  结果  22-23
  讨论  23-27
第三部分 cHL单克隆产物测序及石蜡切片间接原位PCR检测H／RS和背景淋巴细胞IgH基因重排  27-36
  材料和方法  27-31
  结果  31-32
  讨论  32-36
全文小结  36-37
参考文献  37-42
综述  42-49
致谢  49-50
在读期间撰写文章  50-51
附图与说明  51-58

cHL H/RS及背景淋巴细胞BSAP表达与IgH基因重排检测

内容摘要

全文目录

相似论文