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洛克沙胂对小鼠DNA损伤及VEGF和CD34表达的初步分析

作　者: 史玉静
导　师: 张雨梅
学　校: 扬州大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 洛克沙胂 单细胞凝胶电泳 DNA损伤 免疫组化 VEGF CD34
分类号: R114
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 23次
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内容摘要


砷是一种公认的致癌物,可导致皮肤癌、肺癌、膀胱癌等。洛克沙胂虽然毒性较小,但其对细胞DNA损伤作用显著,进入环境后对生物造成潜在的遗传毒性。本试验通过单细胞凝胶电泳技术,研究洛克沙胂对小鼠肝脏和肺脏细胞的DNA影响,初步探讨洛克沙胂作为饲料添加剂对环境生物造成的潜在风险。单细胞凝胶电泳实验中,试验设计为空白对照组、低剂量组(1／10LD50)、中剂量组(1／5LD50)、高剂量组(1／2LD50),洛克沙胂染毒小鼠,染毒时间为1、2、4、6、8d,后处死小鼠,取肝脏、肺脏,制成单细胞悬液,细胞密度调整在106～107个／ml。用改良碱性单细胞凝胶电泳方法,通过CASP软件分析彗星尾部DNA含量、尾矩、Olive尾力矩三个指标。结果表明,小鼠在1／2LD50、1／5LD50剂量组中均表现出明显的DNA损伤,与空白对照组相比有显著性差异(P<0.05),在设定剂量范围内呈现一定的剂量-效应关系和时间-效应关系；同时,小鼠在1／10LD50剂量组中也表现出细胞DNA损伤,与空白对照组相比差异显著(P>0.05)。试验结果表明,洛克沙胂可致小鼠肝脏、肺脏细胞DNA明显的断裂和迁移,对细胞DNA造成损伤,各染毒组与空白对照组有显著差异。免疫组化对洛克沙胂诱导的小鼠肝脏、肾脏组织中VEGF和CD34的表达有较好的定位,VEGF和CD34在1／2LD50剂量组中表达明显,VEGF以胞质中呈棕黄色染色为阳性,CD34在血管内皮胞质或细胞膜有阳性表达。在1／5LD50、1／10LD50剂量组未检测出阳性表达。单细胞凝胶电泳实验及免疫组化均表明洛克沙胂对小鼠细胞有DNA损伤作用,且单细胞凝胶电泳能够检测出早期细胞损伤。单细胞凝胶电泳技术可作为砷化合物DNA损伤的有效检测手段。

全文目录


摘要  3-4
ABSTRACT  4-6
目录  6-9
符号说明  9-10
第一部分 文献综述  10-24
  1 砷的遗传毒性  10-12
    1.1 砷化合物的致畸作用  10-11
    1.2 砷化合物致染色体的损伤  11
    1.3 砷化合物致DNA的损伤  11-12
  2 砷致肿瘤作用  12
  3 砷致肿瘤的作用机理  12-17
    3.1 砷与DNA甲基化  12-13
    3.2 砷与蛋白激酶  13
    3.3 砷诱导氧化应激  13-14
    3.4 砷与生长因子  14
    3.5 砷诱导细胞退化和凋亡  14-15
    3.6 砷与细胞缝隙连接间通讯  15
    3.7 洛克沙胂的促血管生发作用  15-16
    3.8 砷致肿瘤的其他机制  16-17
  4 单细胞凝胶电泳检测细胞DNA损伤的研究概况  17-24
    4.1 细胞的DNA损伤检测比较  17-19
      4.1.1 微核实验  18
      4.1.2 姐妹染色单体交换实验  18
      4.1.3 快速沉降技术  18-19
      4.1.4 单细胞凝胶电泳技术  19
    4.2 彗星实验技术的原理  19-20
    4.3 彗星实验参数的选择  20-21
    4.4 彗星实验的发展和应用  21-24
      4.4.1 在细胞凋亡领域的应用  21
      4.4.2 在辐射生物学领域的应用  21-22
      4.4.3 各种理化因素诱导的DNA损伤与修复的研究  22
      4.4.4 在遗传毒理学领域的应用  22
      4.4.5 在环境生物监测和临床诊断与治疗中的应用  22-23
      4.4.6 在肿瘤治疗方面的应用  23-24
第二部分 实验内容  24-46
  第一章 SGCE检测洛克沙胂对小鼠肝脏、肺脏细胞的DNA损伤  24-41
    1 材料  24-26
      1.1 药品  24
      1.2 试剂  24-25
      1.3 仪器及其他  25
      1.4 试剂配制  25-26
      1.5 实验动物  26
    2 方法  26-28
      2.1 实验动物分组及染毒剂量  26
      2.2 小鼠肝脏、肺脏单细胞悬液的制备  26
      2.3 单细胞凝胶电泳实验  26-28
    3 结果  28-38
      3.1 SCGE检测Rox对小鼠肝脏、肺脏细胞的DNA损伤  28
      3.2 慧星试验参数  28-34
        3.2.1 洛克沙胂对小鼠肝脏细胞DNA损伤  28-31
        3.2.2 洛克沙胂对小鼠肺脏细胞DNA损伤  31-34
      3.3 尾部DNA含量分布统计  34-38
        3.3.1 肝脏细胞尾部DNA含量分布统计  34-36
        3.3.2 肺脏细胞尾部DNA含量分布统计  36-38
    4 讨论  38-40
      4.1 洛克沙胂对细胞DNA损伤  38-39
      4.2 彗星实验中评价指标的选择  39
      4.3 制胶方法的改进  39
      4.4 彗星实验中应注意的问题  39-40
    5 结论  40-41
  第二章 免疫组化方法研究洛克沙胂诱导小鼠肝脏、肾脏组织中VEGF、CD34的表达  41-46
    1 材料与方法  41-42
      1.1 材料  41
      1.2 实验动物分组及染毒剂量  41-42
      1.3 方法  42
    2 结果  42-45
    3 讨论  45-46
全文结论  46-47
参考文献  47-53
致谢  53-54

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中图分类: > 医药、卫生 > 预防医学、卫生学 > 卫生基础科学 > 卫生毒理
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