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人Ⅱ型胶原蛋白的制备、鉴定及其应用的研究

作　者: 刘玲
导　师: 朱平
学　校: 第四军医大学
专　业: 内科学
关键词: Ⅱ型胶原蛋白（CⅡ）类风湿性关节炎（RA）口服耐受胶原诱导性关节炎（CIA）
分类号: R593.22
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
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引　用: 2次
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内容摘要

Ⅱ型胶原蛋白(type Ⅱ collagen，CⅡ)是与RA发病密切相关的自身抗原(autoantigen)之一。为了探讨牛CⅡ(bovine typeⅡcollagen，BCⅡ)与人CⅡ(human type Ⅱ collagen，HCⅡ)在类风湿性关节炎(rheumatoidarthritis，RA)患者中引起的特异性免疫反应是否相同，为口服耐受治疗RA的研究提供实验依据。本研究采用了细胞培养，特异性T细胞活化，流式细胞术(now cytometry，FCM)，western blot印迹法及ELISA技术，制备、鉴定鉴定HCⅡ，并初步研究其免疫原性和建立检测RA患者血清中抗CⅡ自身抗体ELISA系统。主要研究内容如下：采用胃酶消化及盐析法，自引产胎儿的软骨中提取人CⅡ，经DEAE(DE-52)离子交换层析纯化，SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-polyacrylaminegel elecyrophoresis，SDS—PAGE)分析，western blot印迹法鉴定，证实所提取纯化的蛋白为人CⅡ，其分子量为130KD。用人CⅡ免疫小鼠制备抗血清，ELISA检测滴度为1：128的抗血清。证明所提纯人CⅡ具有免疫原性(immunogenicity)和抗原性(antigenicity)。用HCⅡ、BCⅡ作为包被抗原，建立ELISA检测RA患者外周血抗CⅡ抗体第四军医大学硕士学位论文系统。结果显示：（l）RA患者外周血中抗则抗体与HCll和BCll分别反应的阳性率均显著大于对照组，与 HC 11和 BC 11反应双阳性血清都来自 RA早期患者；（2）RA患者外周血中抗 C 11抗体分别与 HC 11和 BCll反应的阳性率无显著差异；③ RA患者抗 C 11抗体阳性组血沉平均水平及 RF阳性率均大于 RA患者抗 C 11抗体阴性组。提示：＊）抗 C 11抗体在 RA的发病中，尤其在发病初期，可能起着重要作用；（2）在检测 RA患者抗 C 11抗体可考虑以牛 C 11代替人Cll作为包被抗原：m抗Cll抗体阳性预示队病情活动性和进展性。为了探讨 BC 11与 HC 11在 RA患者体外诱导 C 11特异性 T细胞活化中所起的作用，我们分离了 RA患者外周血及滑液单个核细胞，分别加 HC 11或 BC 11体外培养，运用流式细胞术，检测表达 CD3“CD69细胞百分率，以此表示 C 11反应性 T细胞的阳性率。可以观察到：（l）RA患者外周血 C 11反应性 T细胞的阳性率大于对照组，RA患者滑液 C 11反应性 T细胞的阳性率大于外周血 C 11 反应性 T细胞的阳性率；①加 HC 11与 BC 11分别培养，RA患者外周血 C 11反应性T细胞的阳性率无显著差别。提示：山 Cll反应性T细胞可能在RA的发病中起重要作用，尤其在炎性关节局部：（2）SC 11在体外研究m的T细胞特异性活化反应上可以代替 HC 11。本研究结果表明：本方法成功地制备鉴定了人 C 11，且该蛋白具有抗原性；抗 C 11抗体及 C 11反应性 T细胞在 RA的发病中都起着重要的作用；牛 C 11在该研究中可以代替人 C 11。这对于口服 C 11治疗 RA提供了理论基础、实验依据和实验材料，同时也为从体液免疫及B细胞作用方面研究RA提供了思路。

全文目录

英缩略语  4-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
前言  11-13
文献回顾  13-39
第一部分人Ⅱ型胶原蛋白的制备与鉴定  39-50
  材料与方法  39-45
  结果  45-47
  讨论  47-50
第二部分类风湿性关节炎患者抗CⅡ抗体的检测及意义  50-56
  材料与方法  50-52
  结果  52-54
  讨论  54-56
第三部分流式细胞术检测类风湿性关节炎患者Ⅱ型胶原蛋白反应性T细胞  56-64
  材料与方法  56-59
  结果  59-61
  讨论  61-64
小结  64-65
致谢  65-66
参考文献  66-76

人Ⅱ型胶原蛋白的制备、鉴定及其应用的研究

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