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hBAFF靶向载有长春新碱的脂质体杀伤淋巴瘤细胞Raji的实验研究

作　者: 张立
导　师: 何凤田
学　校: 第三军医大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 脂质体突变体mBAFF-8 恶性血液病重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠
分类号: R733.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 74次
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内容摘要

淋巴瘤、淋巴细胞白血病及多发性骨髓瘤等恶性血液病不仅患病率较高,而且治疗困难。迄今为止,用于治疗这些疾病的主要方法仍是化学治疗,而化疗药物的剂量大小与治疗效果直接相关,剂量过小则达不到治疗目的,而剂量过大则会产生机体难以耐受的毒副作用。若能使化疗药物靶向聚集于癌组织细胞周围,则不仅可降低药物的使用剂量,而且会明显提高治疗效果。研究发现,TNF家族的B细胞激活因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)的受体不仅在正常B细胞上表达,而且在多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病及非何杰金淋巴瘤等的恶性B细胞上也有较高水平的表达。而BAFF突变体mBAFF-8(217-224八个氨基酸被两个甘氨酸残基替换)只能结合BAFF受体,而不能活化淋巴细胞。此突变体在体内可竞争与受体的结合,从而阻断BAFF的生物学活性,抑制淋巴细胞的活化与增殖。因此,mBAFF-8不仅可用作BAFF的竞争抑制剂来治疗相关的恶性血液病,而且是一种理想的靶向载体。脂质体作为一种新型药物载体,能使药物靶向定位于特定的组织,激活机体自身的免疫功能,减少或降低药物的毒性。为此,本项目在构建了mBAFF-8 cDNA高效表达载体的基础上,经高效表达及纯化制备具有受体结合能力但丧失淋巴细胞活化功能的BAFF突变体,超声分散法制备包载化疗药物的脂质体微粒,然后将mBAFF-8偶联到脂质体表面制成靶向脂质体药物,进而在体外比较所制靶向药物和非靶向药物杀伤Raji细胞的效果,最后观察靶向药物对荷瘤SCID小鼠的抑瘤作用。所取得的主要研究结果如下:1.将已构建好的重组原核表达质粒pQE-80L/mBAFF-8转化大肠杆菌DH5α,采用不同的诱导表达条件诱导目的融合蛋白的表达;经Ni2+-NTA层析系统和Sepharcryl S200凝胶过滤层析对融合蛋白进行纯化;经MTT法检测淋巴细胞的活化情况,鉴定mBAFF-8是否丧失了淋巴细胞活化功能。结果表明最佳表达条件是诱导时间4 h ,诱导温度37℃, IPTG终浓度0.2mmoL/ L。mBAFF-8占菌体总蛋白的35%,蛋白纯度达98%以上,所获突变蛋白能与淋巴细胞表面受体结合,但不能刺激淋巴细胞增殖。2.薄膜超声分散法制备长春新碱脂质体,测得脂质体平均体积粒径大约150nm,

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中英文缩写对照  4-6
英文摘要  6-8
中文摘要  8-10
论文正文 hBAFF 靶向载有长春新碱的脂质体杀伤淋巴瘤细胞Raji 的实验研究  10-50
  前言  10-12
  第一部分人mBAFF-8 在原核系统的可溶性表达及功能鉴定  12-25
    材料与方法  12-17
    结果  17-23
    讨论  23-25
  第二部分 mBAFF-8 靶向载有长春新碱的脂质体的制备及体外靶向研究  25-37
    材料与方法  25-29
    结果  29-34
    讨论  34-37
  第三部分 mBAFF-8 靶向载有长春新碱的脂质体在荷瘤SCID小鼠体内的抑瘤作用  37-43
    材料与方法  37-39
    结果  39-41
    讨论  41-43
  全文结论  43-44
  致谢  44-45
  参考文献  45-50
文献综述脂质体制备以及在抗肿瘤药物研究中的应用  50-59
  参考文献  56-59
学习期间发表的文章  59

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