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SPF动物的舍内微生物气溶胶检测及其桑椹胚冷冻保存的研究

作　者: 柴世庆
导　师: 柴家前；徐平
学　校: 山东农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: SPF动物微生物气溶胶 PCR 16SrRNA序列检测冷冻复苏桑椹胚
分类号: S865.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

SPF动物的发展和应用作为生命科学、生物医药等发展的基础和重要支撑条件,是衡量一个国家和地区在该领域科研水平高低的重要标志之一。在生命科学领域内许多科研项目的确立,成果水平的高低,取决于SPF动物的质量。为了保证实验动物生产的质量和提高实验动物的级别,本文研究了在动态环境下SPF动物房的微生物气溶胶的变化和微生物组成,以及SPF桑椹胚的冷冻复苏。本实验分为四个部分:1 SPF动物舍内微生物气溶胶的动态监控本实验通过检测SPF动物舍内微生物气溶胶粒子浓度的动态变化,探讨建立SPF动物舍内动态标准的可行性。分别检测不同动物舍内0.3μm和0.5μm微生物气溶胶粒子在一周和一天中变化。在一周的监测中,粒子浓度变化比较有规律性。不同畜舍间0.3μm粒子浓度差异显著(P<0.05),其中兔舍与小鼠舍差异极显著(P<0.01);0.5μm粒子浓度除了兔舍与大鼠舍差异不显著外,不同畜舍间的差异极显著。一天中大鼠和兔舍内两种粒子的浓度变化不同,鼠舍内粒子浓度有一个峰值,兔舍内有两个峰值,这是因为这两种动物的饲养方式不同。粒子浓度变化与饲养人员的活动密切相关。SPF动物舍内微生物气溶胶粒子浓度变化具有规律性,一天中粒子浓度控制在十万级,建立相应的动态标准是可行的。2 SPF动物舍内微生物气溶胶与其它环境因素之间的关系为了更好的控制SPF动物的生产环境,对动物舍内氨气浓度、粒子浓度、及温湿度之间的关系进行了检测和分析。使用各种监测仪器,在C57小鼠繁殖房间内选择上午跟下午两个时间段,监测动物舍内的温度、湿度、氨气浓度和微生物气溶胶粒子浓度的变化,并对监测的结果进行统计分析。SPF动物舍内的温度和氨气浓度显著相关,湿度、粒子浓度与氨气浓度相关性不大;SPF动物舍内动态下各项参数标准的制定具有可行性。3 SPF动物舍内微生物气溶胶的检测为了解动态情况下SPF兔饲养房间的微生物气溶胶的情况,对其中的微生物气溶胶的落下菌数量及浮游菌种类进行了检测和分析。采用血琼脂平板对落下菌和浮游菌采样。对落下菌进行计数,分离纯化,并进行比较。

全文目录

英文缩略表  7-8
中文摘要  8-10
英文摘要  10-13
1 前言  13-23
  1.1 微生物气溶胶的研究概况  13-16
    1.1.1 微生物气溶胶中的微生物来源  13-14
    1.1.2 微生物气溶胶对动物危害  14-15
    1.1.3 微生物气溶胶的控制及应用  15-16
  1.2 16SrRNA 序列在环境微生物中检测中的研究  16-19
    1.2.1 16SrRNA 序列特性  16-17
    1.2.2 16SrRNA 序列在环境微生物检测中的应用  17-18
    1.2.3 16SrRNA 序列研究的新进展  18-19
  1.3 SPF 实验动物培育  19-20
  1.4 本研究的目的和意义  20-23
2 SPF 动物舍内微生物气溶胶的动态监控  23-27
  2.1 材料和方法  23
    2.1.1 实验场所及仪器  23
    2.1.2 实验方法  23
    2.1.3 数据处理  23
  2.2 结果  23-27
    2.2.1 一周内微生物气溶胶粒子浓度的变化  23-25
    2.2.2 一天中微生物气溶胶粒子浓度的变化  25-27
3 SPF 动物舍内微生物气溶胶与其它环境因素之间的关系  27-32
  3.1 材料和方法  27
    3.1.1 实验场所及采样方法  27
    3.1.2 数据处理  27
  3.2 结果  27-32
    3.2.1 温度、湿度、氨气浓度采样结果  27-28
    3.2.2 粒子浓度的检测结果  28-29
    3.2.3 温度、湿度、氨气浓度、粒子浓度的相关性及回归分析  29-32
4 SPF 动物舍内微生物气溶胶的检测  32-40
  4.1 材料及方法  32-35
    4.1.1 主要试剂及仪器  32
    4.1.2 采样措施及方法  32
    4.1.3 分离菌株的表型分析  32
    4.1.4 16SrRNA 序列检测  32-35
    4.1.5 系统进化树生成  35
  4.2 结果  35-40
    4.2.1 落下菌的检测  35-36
    4.2.2 16SrRNA 序列检测结果  36
    4.2.3 系统进化树分析  36-40
5 SPF 动物桑椹胚超低温保存的研究  40-46
  5.1 材料与方法  40-42
    5.1.1 实验动物及其超排  40-41
    5.1.2 溶液的配置  41
    5.1.3 胚胎的冷冻复苏及发育能力评定  41-42
    5.1.4 数据处理  42
  5.2 结果  42-46
    5.2.1 兔的超排结果  42
    5.2.2 胚胎的复苏与发育  42-43
    5.2.3 新鲜与冷冻胚胎的形态观察  43-46
6 讨论  46-50
  6.1 SPF 舍内微生物气溶胶的动态监控  46
  6.2 SPF 舍内微生物气溶胶与其他环境因素之间的关系  46-48
  6.3 SPF 动物舍内微生物气溶胶细菌的检测  48-49
  6.4 SPF 动物桑椹胚超低温保存的研究  49-50
7 结论  50-51
8 参考文献  51-63
9 附录  63-66
  9.1 实验动物繁育、生产设施环境指标（静态）  63
  9.2 GB50073-2001 洁净室及洁净区中空气中悬浮粒子洁净度等级  63-64
  9.3 AH010 与 AH011 两个样品去掉引物的测序结果  64-65
  9.4 LB 培养基  65
  9.5 大肠杆菌的保存  65-66
10 致谢  66-67
11 个人简介及硕士期间发表的学术论文目录  67

SPF动物的舍内微生物气溶胶检测及其桑椹胚冷冻保存的研究

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