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蝴蝶兰（Phalaenopsis）脱毒快繁关键技术及其生理基础的研究

作　者: 贺嘉
导　师: 吴震
学　校: 南京农业大学
专　业: 园艺学
关键词: 蝴蝶兰脱毒快繁 RT-PCR 病毒检测热处理化学药剂处理生理基础
分类号: S682.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

蝴蝶兰(Phalaenopsis)又称蝶兰,因其花形别致,色彩艳丽,具有很高的观赏价值,在观赏花卉中占有重要的地位。蝴蝶兰一般均采用设施栽培,在栽培过程中极易受病毒的侵袭,并快速蔓延造成严重损失。植株被感染后可造成植株叶斑、坏死以及花朵变色、畸形等症状,严重影响其品质。因此,研究不同脱毒技术对蝴蝶兰病毒的脱除效果无毒苗的快速繁殖具有重要的应用价值。本试验以蝴蝶兰品系‘EG-727’试管苗为材料,在对蝴蝶兰危害较重的建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus, CymMV)进行检测的基础上,采用二次茎尖培养、茎尖培养结合化学药剂处理及茎尖培养结合热处理进行脱毒,明确其脱毒效果,并对脱毒苗的获得、茎尖芽萌发和增殖等关键技术进行了研究。初步建立了蝴蝶兰品系‘EG-727’高效脱毒快繁的技术体系,为蝴蝶兰脱毒苗的快速繁殖提供科学依据和技术基础。主要研究结果如下：1.38/32℃(昼/夜)热处理49d,蝴蝶兰试管苗叶片出现大面积黄化萎焉,甚至腐烂；可溶性蛋白含量先降低后升高；MDA含量49d内增加,49d后显著降低；相对电导率35d前变化差异较小,35d后显著增加；SOD、POD和APX活性在49d之前表现出不同程度的增加,之后均转为下降趋势；而CAT活性49d内显著降低,49d后迅速升高。该研究结果显示,38/32℃热胁迫致使蝴蝶兰试管苗发生明显氧化伤害的时间节点可能在第49d,利用38/32℃昼夜高温热处理进行脱毒的处理时间不宜超过49d。2.应用RT-PCR技术进行CymMV检测,建立了可应用于蝴蝶兰CymMV的RT-PCR快速检测体系。剥取带病毒的蝴蝶兰试管苗茎尖,研究二次茎尖培养、茎尖培养结合化学药剂处理及茎尖培养结合热处理3种方法对蝴蝶兰CymMV脱除效果的影响。结果表明：茎尖大小对脱毒率和成苗率有显著影响,茎尖越小,成苗率越低,脱毒效果越好。一次或二次2.0mm茎尖培养均不能够有效脱除病毒。虽然茎尖培养结合化学处理及茎尖培养结合热处理降低了蝴蝶兰茎尖的成苗率,但均能显著提高脱毒率。6.0g·L-1板蓝根处理的脱毒率达到77.33%；50mg·L-1病毒唑处理的脱毒率为33.33%。38/32℃变温热处理35d,脱毒率为46.67%,脱毒率和成苗率均显著高于38℃恒温热处理。3.选择2.0 mm的茎尖为外植体,研究了不同基本培养基、6-BA和NAA浓度配比、有机添加物和活性炭浓度对茎尖芽萌发和增殖的影响。结果表明：基本培养基ND对茎尖芽萌发最为适宜,MS培养基则有利于芽的增殖及生长,可形成大量较健壮的丛生芽；1.0mg·L-16-BA和0.1mg·L-1NAA组合时,茎尖的芽萌发效果最好,8.0mg·L-16-BA和0.5mg·L-1NAA则能有效的刺激芽的增殖；添加100m1·L-1椰子汁(CW)有利于茎尖芽的萌发,150g·L-1香蕉泥能显著促进芽的增殖。对于蝴蝶兰品系‘EG-727’试管苗茎尖芽萌发,适宜的培养基为ND+1.0mg·L-16-BA+0.1mg·L-1NAA+100 ml·L-1C W+1.0g·L-1AC+20g·L-1蔗糖+8.0g·L"1琼脂,pH5.4；对于脱毒苗芽增殖和生长,适宜的培养基为MS+8.0mg·L-16-BA+0.5mg·L-1NAA+150g·L-1香蕉泥+30g·L-1蔗糖+6.5g·L-1琼脂,pH5.7。

全文目录

摘要 6-8ABSTRACT 8-10缩略词表 10-11引言 11-12第一章文献综述 12-34 1 蝴蝶兰组培快繁技术研究进展 12-17 1.1 植株离体再生的途径 13-14 1.2 蝴蝶兰组培快繁的主要影响因子 14-17 2 蝴蝶兰建兰花叶病毒研究进展 17-26 2.1 建兰花叶病毒的病原及危害和传播途径 17-18 2.2 蝴蝶兰建兰花叶病毒的诊断及检测技术 18-23 2.3 蝴蝶兰种苗脱毒技术 23-26 参考文献 26-34第二章热处理对蝴蝶兰试管苗形态及叶片抗氧化特性的影响 34-46 1 材料与方法 35-36 1.1 材料 35 1.2 试验设计 35 1.3 测定项目和方法 35-36 1.4 数据处理 36 2 结果与分析 36-41 2.1 热胁迫对蝴蝶兰试管苗植株形态的影响 36-38 2.2 热胁迫对蝴蝶兰试管苗叶片可溶性蛋白含量的影响 38 2.3 热胁迫对蝴蝶兰试管苗叶片叶绿素及类胡萝卜素含量的影响 38-39 2.4 热胁迫对蝴蝶兰试管苗叶片MDA含量和膜透性的影响 39 2.5 热胁迫对蝴蝶兰试管苗叶片抗氧化酶活性的影响 39-41 3 讨论 41-42 参考文献 42-46第三章蝴蝶兰CymMV病毒检测体系建立及脱毒方法的比较 46-60 1 材料与方法 47-51 1.1 材料 47-48 1.2 试验设计 48-51 1.3 数据统计 51 2 结果与分析 51-56 2.1 利用RT-PCR法对蝴蝶兰试管苗脱毒效果的检测 51-52 2.2 不同脱毒方法对蝴蝶兰CymMV脱毒效果的影响 52-56 3 讨论 56-58 参考文献 58-60第四章培养基因素对蝴蝶兰微茎尖芽萌发与增殖的影响 60-74 1 材料与方法 61-64 1.1 材料 61 1.2 试验设计 61-64 1.3 数据统计 64 2 结果与分析 64-69 2.1 培养基因素对微茎尖芽萌发的影响 64-67 2.2 培养基因素对脱毒苗增殖和生长的影响 67-69 3 讨论 69-71 参考文献 71-74图版 74-76全文结论 76-78攻读硕士期间发表的文章 78-80致谢 80

蝴蝶兰（Phalaenopsis）脱毒快繁关键技术及其生理基础的研究

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