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人PTP1B催化结构域的克隆表达及其抑制剂的筛选

作　者: 王岩
导　师: 付学奇
学　校: 吉林大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: II 型糖尿病 PTP1B TC-PTP 抑制剂
分类号: R965.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

为了筛选人PTP1B 催化结构域的非肽类抑制剂,本研究以人PTP1B基因为模板,克隆了PTP1B 催化结构域基因△PTP1B,在大肠杆菌BL21中进行了高效表达。并利用离子交换、凝胶层析等技术分离纯化了△PTP1B。从60 种中药单体中初步筛选出两类ΔPTP1B 特异性抑制剂,通过测定抑制剂的IC50, Ki 值等动力学方面的研究来确定抑制剂的类型。抑制剂的类型可以揭示抑制剂与ΔPTP1B 结合的特异性。通过体外动力学实验得到在ΔPTP1B 和ΔTC-PTP 分别存在的条件下测定抑制剂的IC50值,通过数值比较初步判断9 号和35 号对ΔPTP1B 的抑制具有特异性。9号为竟争性抑制,Ki 值为18.76nM。同时,我们采用了胰岛素受体敏感的细胞系HT1080, NIH3T3 来研究抑制剂对胰岛素受体细胞信号传导通路的影响。终浓度为10μM 的9 号抑制剂在细胞系HT1080 中,与胰岛素受体相关的调节细胞生长的细胞信号通路中对PTP1B 具有很好的抑制作用。与国外文献报道的抑制剂相比具有很高的应用价值。

全文目录

前言  6-23
第一部 ΔPTP18及ΔTC-PTP催化结构域的分离纯化  23-33
  1.1 实验材料  23-24
  1.2 实验方法  24-31
  1.3 结果与讨论  31-32
  1.4 小结  32-33
第二部分ΔPTP18非肽类抑制剂的筛选  33-38
  2.1 实验材料  33
  2.2 实验方法  33-37
  2.3 小结  37-38
第三部分ΔPTP18非肽类抑制剂的动力学分析  38-53
  3.1 常温条件下ΔPTP18Km 值  38-41
  3.2 IC50的测定  41-47
  3.3 Ki的测定  47-52
  3.4 小结  52-53
第四部分PTP18抑制剂在细胞水平的作用  53-57
  4.1 实验材料  53-54
  4.2 实验方法  54-55
  4.3 结果与讨论  55-56
  4.4 小结  56-57
总结  57-58
参考文献  58-62
中文摘要  62-65
英文摘要  65-68
致谢  68-70
导师简介  70-72
作者简介  72

人PTP1B催化结构域的克隆表达及其抑制剂的筛选

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