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猪瘟血清抗体检测试剂盒的研制与抗猪瘟病毒基因工程疫苗的研究

作　者: 王海震
导　师: 陈溥言
学　校: 南京农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2 A/D抗原区间接ELISA 基因工程疫苗
分类号: S854.43
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
下　载: 258次
引　用: 1次
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内容摘要

利用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增出猪瘟病毒石门株(CSFV Shimen strain)囊膜糖蛋白E2全基因,再以E2基因为模板扩增其中适于在E.coli中表达且抗原性较好的基因片段(E2蛋白A/D抗原区基因序列),将扩增的两片段依次插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建成重组质粒pET-E2和pET-2E2,将两质粒转化受体菌BL21(DE3),对转化重组菌用IPTG进行诱导表达并对诱导表达条件进行了优化,使目的蛋白得到高效表达。应用His-bind树脂层析柱纯化重组2E2蛋白,纯化产物经SDS-PAGE电泳鉴定其纯化效果,并用Western-blot检验其特异性。在此基础上,利用重组2E2蛋白作包被抗原,优化反应条件后,建立了检测抗猪瘟病毒血清抗体的重组2E2蛋白—ELISA方法,应用该方法和间接血凝检测试剂盒对收集的120份血清进行检测,结果显示,间接ELISA方法与间接血凝检测方法相比具有更好的表现力。本研究以猪IgG基因为模板,设计了一对引物,并应用PCR方法扩增出其中重链恒定区部分基因序列。将其克隆入pET-2E2中,构建成pET-2E2-scIgG重组质粒并对其进行诱导表达。取经纯化过的E2,2E2和2E2-scIgG重组蛋白分别免疫小白鼠,结果表明,三种蛋白均可刺激机体产生体液免疫应答和细胞免疫应答,2E2-scIgG蛋白的免疫效果明显优于另两种蛋白,并且在所选的抗原区域可能存在一个或多个T细胞表位。

全文目录

符号说明  4-5
目录  5-7
中文摘要  7-8
英文摘要  8-10
第一部分文献综述  10-22
  第一章文献综述  10-22
    一.猪瘟病毒的分类、形态与结构  10
    二.病毒基因组结构及其编码蛋白功能  10-14
    三.病毒的复制、进化及分子流行病学  14-16
    四.猪瘟诊断方法研究进展  16-20
    五.CSFV疫苗研究进展  20-22
第二部分研究内容  22-59
  第二章含编码猪瘟病毒E2蛋白A／D抗原区基因原核表达载体的构建及表达  22-37
    摘要  22-23
    1.材料和方法  23-30
    2.结果  30-34
    3.讨论  34-37
  第三章以猪瘟病毒2E2重组蛋白为包被抗原间接ELISA方法的建立  37-48
    摘要  37-38
    1.材料和方法  38-41
    2.结果  41-46
    3.讨论  46-48
  第四章抗CSFV基因工程疫苗的研究  48-59
    摘要  48-49
    1.材料和方法  49-52
    2.结果  52-57
    3.讨论  57-59
参考文献  59-64
全文总结  64-65
致谢  65-66

猪瘟血清抗体检测试剂盒的研制与抗猪瘟病毒基因工程疫苗的研究

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