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家蚕ovo及otu基因的研究

作　者: 薛高旭
导　师: 贡成良
学　校: 苏州大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 家蚕生殖发育 RNA干扰超表达
分类号: S881.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 46次
引　用: 2次
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内容摘要

果蝇（Drosophila）卵巢的正常发育需要一系列基因共同参与,其中ovo和otu基因与卵巢发育密切相关。家蚕是鳞翅目昆虫的模式种,有关家蚕卵巢发育相关基因及分子机制的研究报道甚少。本研究以GenBank中已公开的果蝇（Drosophila melanogaster）OVO蛋白B亚型（GenBank登录号:NP₇26971）氨基酸序列为基础通过电子克隆的方法获得家蚕ovo（Bmovo）。通过RT-PCR在家蚕精巢、卵巢组织中分别获得了Bmovo基因的3种可变剪接亚型,分别命名为Bmovo-1、Bmovo-2和Bmovo-3。同源比对显示BmOVO-1和BmOVO-2各含有1个第18家族壳多糖酶（chitinase）的活性位点,3个C2H2型的锌指结构基序,BmOVO-3只含有3个C2H2型的锌指结构基序,暗示BmOVO可能属于转录因子并有可能参与能量代谢。家蚕卵巢来源的BmN细胞定位结果显示BmOVO主要定位于细胞核。实时定量PCR（Real-Time PCR）结果显示Bmovo mRNA的丰度在家蚕卵巢组织中最高,在血细胞中最低。Western blotting结果显示Bmovo在卵巢和脂肪体中都能表达。通过RNA干扰（RNA interference,RNAi）下调和转基因超表达上调Bmovo表达水平初步探讨了基因的功能,结果显示对家蚕幼虫注射双链RNA（dsRNA）后,与空白对照组相比实验组蚕卵的受精率无明显变化,孵化率稍微下降,但造卵数下降比较明显,造卵数下降约15%,并且数据显示造卵数、孵化率的下降是由于对雌蚕注射dsRNA引起的;雌蚕注射dsRNA后蛹体重、茧层量均增加约10%,雄蚕注射dsRNA后蛹体重增加约1.0%,但茧层量增加约10.8%;家蚕超表达BmOVO-1对性腺发育、造卵数、受精率和孵化率等没有影响,G0、G1代能够正常生殖发育。以果蝇Otu蛋白B亚型（GenBank登录号:NP₅11089）的氨基酸序列为基础通过电子克隆的方法获得家蚕out（Bmotu）基因序列,RT-PCR结果显示Bmotu基因在精巢中有4种可变剪接亚型,但在卵巢中只有1种。Microarray数据库分析显示Bmotu基因的可变剪接体具有组织表达差异。生物信息学分析发现Bmotu编码的蛋白与果蝇Otu蛋白结构类似,含有半胱氨酸蛋白酶结构域（Otu结构域）,Tudor结构域,脯氨酸基序。研究结果为阐明家蚕生殖发育分子机制奠定了基础,为性腺发育的遗传操作提供了靶基因。

家蚕ovo及otu基因的研究

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