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HBV x siRNA抑制HepG2.2.15细胞的实验研究
作 者: 孙越鹏
导 师: 李长福；范芳
学 校: 遵义医学院
专 业: 生物化学与分子生物学
关键词: RNA干扰 HBV x基因 HepG2.2.15细胞 hTERT MMP-2
分类号: R512.62
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
下 载: 29次
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内容摘要
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目的：观察HBV x siRNA对HepG2.2.15细胞生长及hTERT与MMP-2基因表达的影响,探讨HBVx基因沉默与肝癌细胞生长与转移的关系。方法：1.pSIHBV/X质粒的鉴定与扩增。2. HepG2.2.15细胞的培养。3.pSIHBV/X与pEGFP-N1共转染检测转染效率。4.RT-PCR法对沉默效率的评估。5. ELISA法检测细胞上清液中HBsAg和HBeAg的水平。6.MTT法检测细胞的增殖情况。7. AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况。8.Real-time PCR法检测hTERT与MMP-2 mRNA表达的变化。9. Western blot方法检测hTERT与MMP-2蛋白表达的变化。结果：通过测序验证pSIHBV/X质粒构建正确；经pEGFP-N1评断转染效率为27%；RT-PCR检测HBV x基因的沉默效率为53.6%;pSIHBV/X质粒转染HepG2.2.15细胞后,HepG2.2.15细胞上清液中HBsAg和HBeAg的水平下降,与对照组比较差异有统计学意义(p<0.01)；转染pSIHBV/X质粒后,MTT法检测结果显示HepG2.2.15细胞的增殖受到抑制,AnnexinV-FITC/PI双染法检测结果显示HBV x siRNA可促进细胞的凋亡,与对照组比较差异有统计学意义(p<0.01)；Real-time PCR和Western blot检测结果显示,HepG2.2.15细胞中hTERT与MMP-2基因的mRNA水平和蛋白水平表达分别有不同程度的下调,与对照组比较差异有统计学意义(p<0.05)。结论：利用RNA干扰技术抑制]HepG2.2.15细胞中HBVx基因的表达,能降低HepG2.2.15细胞中HBsAg和HBeAg的水平、抑制细胞的增殖、促进细胞凋亡；同时对HepG2.2.15细胞中癌症标志基因hTERT与癌症转移标志基因MMP-2在mRNA水平和蛋白水平的表达都有抑制作用。
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全文目录
英汉缩略词对照表 5-6
摘要 6-7
Abstract 7-9
前言 9-12
材料与方法 12-30
结果 30-44
讨论 44-48
结论 48-49
参考文献 49-52
综述 52-58
参考文献 56-58
致谢 58-59
作者简介 59
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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 传染病 > 病毒传染病 > 病毒性肝炎 > 乙型肝炎
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