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大熊猫基因组DNA文库的构建

作　者: 林翙
导　师: 方盛国
学　校: 浙江大学
专　业: 遗传学
关键词: 大熊猫细菌人工染色体基因组文库
分类号: Q785
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
下　载: 180次
引　用: 2次
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内容摘要

基因组文库是指含有某种生物体全部基因的随机片段的重组DNA克隆群体，它是进行分子克隆和基因组结构和功能研究的基础。其中细菌人工染色体(BAC)文库因其转化效率高、嵌合体少、插入片段易回收以及容载量较大等优点而被广泛应用。本项研究以大熊猫的成纤维细胞以及肝组织细胞为材料，以pBeloBAC11为载体，构建大熊猫的基因组细菌人工染色体DNA文库。该文库包含了39264个克隆，分别保存于409块96孔细胞培养板中。经过对100个随机抽样的克隆分析表明，插入片段的平均大小为160kb，因此约相当于大熊猫基因组的2倍，即2个库容量。酶切10个克隆证明，经100代繁殖其插入片段仍稳定不变。

全文目录

一摘要  4-6
二综述  6-12
三前言  12-14
四材料与方法  14-27
  1 材料  14
  2 方法  14-27
    2.1 BAC载体的制备  14-21
      2.1.1 质粒DNA的小量制备  15-17
      2.1.2 BAC载体的大量提取和纯化  17-20
      2.1.3 BAC载体的后期处理(酶切和去磷酸化)  20-21
    2.2 高分子量DNA的制备  21-23
      2.2.1 大熊猫成纤维细胞的培养  21-22
      2.2.2 细胞凝胶包埋块的制备及处理  22-23
    2.3 高分子量DNA的不完全消化  23
    2.4 DNA大小合适片段的获得  23-24
    2.5 连接与转化  24-25
    2.6 克隆的挑取及保存  25
    2.7 文库的质量检测  25-27
      2.7.1 插入片段的酶切分析  25-26
      2.7.2 克隆的稳定性检测  26-27
五结果与分析  27-31
  1 BAC载体的制备  27
  2 脉冲场电泳带的形成  27-28
  3 电转化参数  28
  4 文库构建的效率  28-29
  5 BAC克隆的酶切结果  29
  6 克隆稳定性的检测结果  29-31
六讨论  31-34
七参考文献  34-40
八致谢  40

大熊猫基因组DNA文库的构建

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