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一株海洋真菌的鉴定及其次级代谢产物的研究

作　者: 李玮
导　师: 欧阳明安
学　校: 福建农林大学
专　业: 农药学
关键词: 海洋真菌 次级代谢产物 烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus, TMV) 抗肿瘤 核磁共振
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 129次
引　用: 2次
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内容摘要


海洋是生命的发源地,其生物多样性远远超过陆生生物。其中海洋微生物约有亿种之多。海洋微生物的物种多样性决定了其代谢产物的多样性,因而海洋环境下生活的微生物是新型生物活性物质的重要源泉。海洋微生物生物合成能力卓越,它们可“独立合成”许多结构和功能都比较特别的生物活性物质。国内外学者已经从海洋细菌、放线菌和真菌的培养物中分离到大量的活性物质,有些结构罕见,有些活性独特,有些兼而有之。本论文选取实验室中经活性筛选得到的一株活性海洋真菌0312F1,其发酵液具有抗烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus, TMV)抑制活性、抗肿瘤活性及抗菌活性。经形态鉴定及分子生物学鉴定,菌株0312F1为海洋真菌Penicillium oxalicum。对该菌株进行大米固体发酵培养、发酵产物甲醇提取、抗TMV和抗肿瘤活性的追踪。结果显示,该菌株发酵产物甲醇提取物的水溶性小分子部分是其活性部位。通过活性追踪实验,采用正相柱层析、反相柱层析和液相色谱分离方法,对菌株大米发酵物甲醇提取物的水溶性小分子浸膏进行分离,应用1H-1H COSY,HSQC,HMBC和ROESY在内的一维和二维核磁共振技术进行鉴定,共得到5个纯品化合物。分别为:化合物L-22、L-26、L-28、L-31、L-32。其中化合物L-31在200μg/mL供试浓度下,对TMV增殖的抑制率达到72.17%,抑制中浓度(EC50)为100.80μg/mL,抑制作用明显。

全文目录


摘要  6-7
Abstract  7-8
1 前言  8-29
  1.1 海洋生物的研究  9-27
    1.1.1 海洋植物化学成分和生物活性研究  9
    1.1.2 海洋动物化学成分和生物活性研究  9-11
    1.1.3 海洋微生物化学成分和生物活性研究  11-27
  1.2 总结和展望  27
  1.3 本实验的研究背景  27-29
2 实验所用的材料和方法  29-39
  2.1 实验所用的材料和仪器  29-31
    2.1.1 仪器和、溶剂和药品  29-30
    2.1.2 实验材料  30-31
  2.2 实验方法  31-39
    2.2.1 菌株发酵液的制备  31
    2.2.2 抑制TMV 增殖活性测定  31
    2.2.3 抗肿瘤活性测定  31-32
    2.2.4 黄嘌呤氧化酶抑制活性的检测  32
    2.2.5 菌株形态鉴定  32
    2.2.6 菌株和质粒  32-33
    2.2.7 菌株基因组总DNA 提取及PCR 反应  33-34
    2.2.8 PCR 扩增产物 1%琼脂糖凝胶电泳及回收  34-35
    2.2.9 肠杆菌克隆载体的构建  35-36
    2.2.10 序列测定与分析  36
    2.2.11 水溶性提取物对植物病原菌的抑制作用  36
    2.2.12 提取和分离  36-39
3 结果和讨论  39-74
  3.1 0312F1 形态鉴定  39
  3.2 菌株ITS 序列扩增结果  39-40
  3.3 菌株ITS rDNA 序列克隆载体的酶切鉴定  40-41
  3.4 菌株ITS rDNA 序列测定结果  41
  3.5 ITS rDNA 序列同源性发育分析  41-43
  3.6 菌株抑菌活性的研究  43-46
    3.6.1 海洋真菌发酵产物的提取物对植物病原真菌生长量的作用  43-45
    3.6.2 海洋真菌发酵产物的提取物对植物病原真菌的抑制作用  45
    3.6.3 海洋真菌活性提取物对植物病原真菌的抑制中浓度（EC50）  45-46
  3.7 活性菌株发酵产物粗提物抑制TMV 增殖的活性  46
  3.8 菌株0312F1 发酵产物粗提物各部分抑制TMV 增殖和抗肿瘤的活性  46-47
  3.9 大米发酵产物甲醇提取物黄嘌呤氧化酶抑制活性  47-48
  3.10 菌株0312F1 发酵产物活性追踪至Sephadex LH-20 柱后活性部位各组分抗肿瘤的活性  48-49
  3.11 化合物抑制TMV 增殖活性及抑制中浓度  49-51
  3.12 化合物分离、结构和图谱  51-74
    3.12.1 化合物分离具体过程  51-54
    3.12.2 化合物总括  54-55
    3.12.3 化合物L-22  55-58
    3.12.4 化合物L-31  58-61
    3.12.5 化合物L-26  61-67
    3.12.6 化合物L-28  67-72
    3.12.7 化合物L-32  72-74
4 讨论与结论  74-76
  4.1 抑菌实验  74
  4.2 发酵条件  74
  4.3 化合物结构和活性测定  74-76
参考文献  76-81
附录1 缩略语及含义  81-83
附录2 研究生期间发表、投稿的论文  83-84
致谢  84

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
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