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中药植物雌激素对氧化损伤的人晶状体上皮细胞的影响

作　者: 郭娜
导　师: 黄秀榕；祁明信
学　校: 福建中医学院
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 雌激素异补骨脂素蜕皮甾酮白内障晶状体上皮细胞氧化损伤细胞凋亡防治
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

研究目的本研究旨在探讨具有雌激素活性的中药单体异补骨脂素（Isopsoralen,ISR）和蜕皮甾酮（Ecdysterone,ECR）对过氧化氢诱导的氧化损伤的人晶状体上皮细胞（Human Lensepithelial cell,HLE-B₃）的影响,从氧化损伤及细胞凋亡的角度揭示中药植物雌激素防治白内障的细胞和分子机制,为寻求防治白内障的确切有效的药物提供科学的实验依据。研究方法本研究用H₂O₂与人晶状体上皮细胞系HLE-B₃细胞（HLE-B₃）共同孵育以复制氧化损伤模型,再采用异补骨脂素、蜕皮甾酮与HLE-B₃分别孵育,并以雌激素（Estradiol,E₂）作为对照,然后进行下列研究,从氧化损伤及细胞凋亡的角度进一步探讨中药植物雌激素防治白内障的细胞和分子机制。一、采用四甲基偶氮唑蓝法（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）测定不同浓度的ISR和ECR对氧化损伤的HLE-B₃的影响。二、采用化学比色法检测氧化损伤的HLE-B₃内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）,谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-px）,过氧化氢酶（Catalase,CAT）,丙二醛（Malonaldehyde,MDA）的含量变化。探讨ISR和ECR的抗氧化作用及酶学机制。三、采用透射电子显微镜观察ISR和ECR对氧化损伤的HLE-B₃凋亡形态的影响。四、采用流式细胞仪（flow cytometer,FCM）检测氧化损伤的HLE-B₃凋亡亚二倍体峰,研究HLE-B₃核内DNA含量的变化。探讨ISR和ECR影响HLE-B₃凋亡的细胞核机制。五、采用FCM检测氧化损伤的HLE-B₃的线粒体跨膜电位（mitochondria membrane pot-ential,△ψM）的变化,探讨ISR和ECR影响HLE-B₃凋亡的细胞质机制。研究结果一、MTT法检测显示,H₂O₂组HLE-B₃吸光度值比空白对照组显著降低（P＜0.01）,不同浓度的ISR和ECR的HLE-B₃吸光度值均比H₂O₂组显著升高,且A值随ISR浓度的增高而逐渐升高,并呈浓度依赖关系。二、化学比色法检测显示,H₂O₂组SOD、GSH-px、CAT活性均比正常组显著降低,而E₂、ISR和ECR组SOD、GSH-px、CAT活性均比H₂O₂组升高（P＜0.01）;H₂O₂组MDA含量比正常组显著升高;而E₂、ISR和ECR组MDA含量比H₂O₂组均降低（P＜0.01）。三、电子显微镜观察凋亡形态的结果显示:H₂O₂组可见核染色质边集、固缩,凋亡小体形成等细胞凋亡的改变;亦可见细胞整体结构破坏,胞浆内容物溶解消失,胞核碎裂等细胞坏死的改变。E₂、ISR和ECR组与H₂O₂组比较,细胞凋亡的形态改变明显减轻、未出现坏死。四、FCM检测显示,H₂O₂组DNA含量比对照组显著下降;E₂组HLE-B₃核内的DNA含量与H₂O₂组相比较显著升高（P＜0.01）:ISR和ECR组HLE-B₃核内的DNA含量与H₂O₂组相比较均显著升高（P＜0.01）。五、FCM检测显示,H₂O₂组线粒体跨膜电位比对照组显著下降;E₂组的线粒体跨膜电位与H₂O₂组相比较显著升高（P＜0.01）;ISR和ECR组的线粒体跨膜电位与H₂O₂组相比较均显著升高（P＜0.01）。研究结论一、H₂O₂可引起HLE-B₃发生氧化损伤。二、ISR和ECR可减轻HLE-B₃氧化损伤,提高HLE-B₃内抗氧化酶SOD、GSH-px和CAT活性,降低MDA含量是其重要的作用机制之一。三、H₂O₂可引起人晶状体上皮细胞发生凋亡。四、ISR和ECR可减轻H₂O₂引起的HLE-B₃凋亡,提高HLE-B₃核内DNA含量、降低细胞凋亡率也是其重要的机制之一。五、ISR和ECR减轻H₂O₂引起HLE-B₃凋亡的另一重要机制是提高线粒体跨膜电位、启动细胞质途径。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
前言  9-13
第一部分异补骨脂素、蜕皮甾酮对氧化损伤的HLE-B_3活性的影响  13-21
  1.1 材料与方法  13-17
  1.2 结果  17-19
  1.3 讨论  19
  1.4 小结  19-20
  1.5 附图  20-21
第二部分异补骨脂素、蜕皮甾酮对氧化损伤的HLE-B_3氧化指标的影响  21-29
  1.1 材料与方法  21-22
  1.2 结果  22-23
  1.3 讨论  23-25
  1.4 小结  25-27
  1.5 附图  27-29
第三部分异补骨脂素、蜕皮甾酮对氧化损伤的HLE-B_3凋亡超微结构的影响  29-34
  1.1 材料与方法  29-30
  1.2 结果  30
  1.3 讨论  30-31
  1.4 小结  31-32
  1.5 附图  32-34
第四部分异补骨脂素、蜕皮甾酮对氧化损伤的HLE-B_3中DNA含量的影响  34-41
  1.1 材料与方法  34-35
  1.2 结果  35-36
  1.3 讨论  36-37
  1.4 小结  37-38
  1.5 附图  38-41
第五部分异补骨脂素、蜕皮甾酮对氧化损伤的HLE-B_3线粒体膜电位的影响  41-48
  1.1 材料与方法  41-42
  1.2 结果  42-43
  1.3 讨论  43-44
  1.4 小结  44-45
  1.5 附图  45-48
总结  48-50
参考文献  50-54
致谢  54-55
文献综述  55-59
作者简历  59

中药植物雌激素对氧化损伤的人晶状体上皮细胞的影响

内容摘要

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