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肝康颗粒对免疫性肝损伤模型小鼠CD_4~+、CD_8~+、IL-12及IFN-γ的影响

作　者: 刘松灿
导　师: 彭勃
学　校: 河南中医学院
专　业: 中医内科学
关键词: 免疫性肝损伤肝康颗粒刀豆蛋白A CD4+ CD8+ IFN-γ IL-12
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

【目的】探讨肝康颗粒对刀豆蛋白A（Concanavalin A, ConA）所致小鼠免疫性肝损伤的保护作用及对CD₄⁺（cluster of differentiation 4, CD₄⁺）、CD₈⁺（cluster of differentiation 8, CD₈⁺）、白细胞介素12（Interleukin-12, IL-12）及γ干扰素（Interferon-γ, IFN-γ）的影响。【方法】昆明种小鼠60只,体重18-22g,随机分为6组,分别为空白对照组,模型组,香菇菌多糖片（Lentinus Edodes Mycelia Polysacharide Tablets, LEMP）组,肝康颗粒高、中、低剂量组,每组10只。造模前连续7天给小鼠灌胃,每天1次。高、中、低剂量组分别按12.5g/kg,10.0g/kg,7.5g/kg的剂量灌服肝康颗粒溶液;香菇菌多糖片组灌服香菇菌多糖片混悬液0.06g/kg;空白对照组和模型组灌服等体积的生理盐水。于第7天（禁食14h,不禁水）,末次给药1h后,开始造模,除空白对照组外,其余各组均以0.02g/kg按体重给予ConA尾静脉注射1次,空白对照组给予等体积的生理盐水尾静脉注射。造模后6h处死。分别检测血清丙氨酸氨基转移酶（Alanine Aminotransferase, ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（Aspertate Aminotransferase, AST）,T辅助细胞CD₄⁺,T抑制细胞CD₈⁺,IL-12, IFN-γ,观察肝组织普通病理形态学变化和肝、脾、胸腺指数。【结果】1)肝功能变化:与空白组比较,模型组小鼠血清ALT、AST活性显著升高;与模型组比较,肝康颗粒各给药组小鼠转氨酶明显降低（P<0.05）,以高、中剂量组最明显。2)CD₄⁺、CD₈⁺改变:模型组小鼠全血CD₄⁺水平明显降低,CD₈⁺水平明显升高,与空白对照组比较有统计学意义（P<0.05）,肝康颗粒各给药组及香菇菌多糖片组能明显提高全血CD₄⁺水平、降低CD₈⁺水平,其中肝康颗粒高剂量组和香菇菌多糖片组提高CD₄⁺水平效果明显,与模型组比较具有统计学意义（P<0.05）;肝康颗粒各剂量组均能明显降低CD₈⁺水平,其中以肝康颗粒高剂量组效果明显,与模型组比较有统计学意义（P<0.05）。3)病理学变化:模型组小鼠可见明显的肝细胞水样变性、点状坏死等损伤性改变;与模型组比较,各给药组病理学改变减轻,以肝康颗粒高剂量组减轻明显。4)IL-12的改变:模型组小鼠血清中IL-12含量明显升高;肝康颗粒各给药组小鼠IL-12含量较模型组降低（P<0.05）。5)IFN-γ的改变:模型组小鼠血清中IFN-γ含量明显升高;肝康颗粒各给药组小鼠IFN-γ含量较模型组降低（P<0.05）。6)脏器指数的改变:模型组小鼠肝、脾、胸腺指数明显高于空白对照组（P<0.05）,尤以肝、脾指数改变明显（P<0.01）;各给药组均可降低脏器指数,与模型组比较有明显的差异（P<0.05）,且呈剂量依赖性。【结论】1)肝康颗粒具有益气健脾、补益肝肾、清热解毒、祛湿化瘀之功效,可有效防治免疫性肝损伤（Immunological liver injury, ILI）。2)肝脏是ConA体内诱导毒性的靶器官,CD₄⁺T细胞的活化与ConA诱导的肝损伤关系密切,其在ConA性肝损伤模型中是作为效应细胞起作用的,IFN-γ和IL-12是ConA诱导免疫性肝脏损伤模型中最重要的细胞因子,这两个因子是ConA诱导免疫性肝损伤的病理机制之一。3)肝康颗粒具有较好的抗ConA诱导免疫性肝损伤模型的效果,且呈剂量依赖性。4)肝康颗粒的保肝作用通过提高CD₄⁺含量,降低CD₈⁺、IL-12、IFN-γ含量等环节来实现的。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-12
材料与方法  12-17
  1 实验材料  12-13
    1.1 动物  12
    1.2 药物  12
    1.3 主要试剂  12
    1.4 主要仪器  12-13
  2 实验方法  13-16
    2.1 动物分组及给药  13
    2.2 模型复制  13
    2.3 样品的采集和处理  13
    2.4 血清生化学检测  13-15
    2.5 CD_4~+、CD_8~+的检测  15
    2.6 IL-12 的检测  15
    2.7 IFN-γ的检测  15
    2.8 肝组织切片及HE 染色方法  15-16
  3 统计学分析  16-17
    3.1 统计分析软件  16
    3.2 统计分析方法  16-17
结果  17-23
  1 肝康颗粒对ConA 诱导的免疫性肝损伤小鼠一般情况的影响  17
  2 肝康颗粒对ConA 诱导的免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST 活性的影响  17-18
  3 肝康颗粒对ConA 诱导的免疫性肝损伤小鼠肝脏指数、脾脏指数、胸腺指数的影响  18-19
  4 肝康颗粒对ConA 诱导的免疫性肝损伤小鼠外周血CD_4~+、CD_8~+的影响  19-20
  5 肝康颗粒对ConA 诱导的免疫性肝损伤小鼠IL-12、IFN-γ的影响  20-21
  6 肝康颗粒对ConA 诱导的免疫性肝损伤小鼠肝脏形态学的影响  21-23
    6.1 大体形态(肉眼观察)  21-22
    6.2 组织形态(光镜观察)  22-23
讨论  23-32
  1 现代医学对ILI 的认识  23-24
    1.1 遗传因素  23
    1.2 病毒感染及免疫失调  23-24
  2 中医学对ILI 的认识  24-26
    2.1 病因病机的认识  24-25
    2.2 中医药防治免疫性肝损伤的研究  25-26
  3 导师对其病因病机和治法的认识  26-28
    3.1 基本病机是正气不足、湿热毒邪羁留  26-27
    3.2 根本治疗大法是扶正祛邪、清热解毒、祛湿化瘀  27
    3.3 肝康颗粒方药分析  27-28
  4 ILI 动物模型的评价  28-29
    4.1 ILI 动物模型研究现状  28
    4.2 ConA 模型评价  28-29
  5 香菇菌多糖片药效评价  29
  6 肝康颗粒干预ConA 免疫性肝损伤小鼠作用机理探讨  29-32
    6.1 肝康颗粒干预ConA 免疫性肝损伤小鼠功能的影响  29-30
    6.2 肝康颗粒对ConA 诱导免疫性肝损伤小鼠肝、脾、胸腺指数的影响  30
    6.3 肝康颗粒对ConA 诱导免疫性肝损伤小鼠外周血CD_4~+、CD_8~+、CD_4~+影响  30-31
    6.4 肝康颗粒对ConA 诱导免疫性肝损伤小鼠IL-12、IFN-γ的影响  31
    6.5 肝康颗粒对ConA 诱导免疫性肝损伤小鼠肝脏形态学的影响  31-32
结论  32-33
致谢  33-34
参考文献  34-38
附录  38-45
  附录1 肝组织普通病理照片  38-39
  附录2 文献综述  39-45
    参考文献  43-45
  附录3 在校期间发表论文论著和科研情况  45

肝康颗粒对免疫性肝损伤模型小鼠CD_4~+、CD_8~+、IL-12及IFN-γ的影响

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