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日本血吸虫rSjLAP和rSjFBPA重组蛋白抗原疫苗的保护性免疫效果评价

作　者: 刘萍
导　师: 沈继龙
学　校: 安徽医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 日本血吸虫重组抗原亮氨酸氨基肽酶果糖二磷酸醛缩酶免疫保护
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:利用rSjLAP和rSjFBPA加佐剂分组免疫BALB/c小鼠,探讨基于2-DE和血清蛋白质组筛选的上述二种重组抗原的免疫保护效果;通过福氏佐剂和纳米C60佐剂在增强免疫效果方面的比较,观察纳米C60佐剂在血吸虫分子疫苗研发中的价值。方法:从重组质粒中诱导表达rSjLAP和rSjFBPA,分别用亲和层析法(His-Bind Purification Kit)纯化,并用Bradford法分别检测二者的含量。将6周龄BALB/c小鼠随机分为7组,每组6只。除对照组外,每组均给予rSjLAP或rSjFBPA 100μg/次/鼠,腹部皮下多点注射,共免疫3次,每次间隔2周。按以下分组免疫:①对照组:皮下注射等体积的生理盐水;②rSjLAP+福氏佐剂组;③rSjFBPA+福氏佐剂组;④rSjLAP+ rSjFBPA+福氏佐剂组;⑤rSjLAP+纳米C60佐剂组;⑥rSjFBPA+纳米C60佐剂组;⑦rSjLAP+ rSjFBPA+纳米C60佐剂组。免疫5周后,收集小鼠血清,用ELISA法测定小鼠血清IFN-γ和IL-4的含量(pg/ml)。用尾蚴感染BALB/c小鼠,30±2条/鼠,尾蚴感染6周后,处死小鼠,收集成虫,计算减虫率;收集肝组织虫卵,计算减卵率。结果:不同实验组BALB/c小鼠,测得2、3及4组重组蛋白加福氏佐剂组诱导的减虫率分别为:35.5%(P<0.05); 33.0%(P<0.05)、38.1%(P<0.05);5、6及7组重组蛋白加纳米C60佐剂诱导的减虫率分别为:43.1%(P<0.05)、39.1%(P<0.05)、45.2%(P<0.05); 2、3及4组诱导的减卵率分别为:40.2%(P<0.05),42.6%(P<0.05),48.9%(P<0.05),5、6、及7组诱导的减卵率分别为41.6%(P<0.05),45.4%(P<0.05),46.9%(P<0.05)。ELISA法测定对照组、rSjLAP+福氏佐剂组、rSjFBPA+福氏佐剂组各组IFN-γ水平(pg/ml)分别为:20.4,20.1,19.6;IL-4水平(pg/ml)分别为:192.0,382.0,518.0。结果表明:rSjLAP和rSjFBPA加佐剂均能够明显提高蛋白对BALB/c小鼠抗血吸虫感染的保护性免疫作用。结论:rSjLAP和rSjFBPA,加福氏佐剂或纳米C60佐剂免疫BALB/c小鼠,获得了一定的免疫保护作用;福氏佐剂和纳米C60佐剂均增强了重组蛋白的免疫效果,实验结果表明福氏佐剂的免疫保护效果和纳米C60佐剂差别不大,但低剂量的纳米C60佐剂对细胞不造成损伤,危害较小。以上结果表明,rSjLAP和rSjFBPA有可能作为日本血吸虫病的候选疫苗分子,为其开发应用研究打下了基础。各实验组小鼠IFN-γ水平无显著变化,IL-4水平变化明显,表明日本血吸虫感染BALB/c小鼠伴随蛋白抗原免疫,主要表现为Th2细胞应答反应。

全文目录

中英文词汇对照表  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-12
前言  12-14
材料与方法  14-29
  实验材料  14-18
  实验仪器  18-20
  实验方法  20-29
    重组质粒rSjLAP 和rSjFBPA 的大量制备和鉴定  20-26
    rSjLAP 和rSjFBPA 及其免疫保护性的研究  26-28
    小鼠肝脏的病理变化  28-29
    ELISA 方法检测小鼠血清中IL-4 和IFN-γ的含量  29
结果  29-36
讨论  36-38
结论  38-39
参考文献  39-44
附录一（个人简历）  44-46
附录二（致谢）  46-47
附录三（综述）  47-59
  参考文献  55-59

日本血吸虫rSjLAP和rSjFBPA重组蛋白抗原疫苗的保护性免疫效果评价

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