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急性时相血清淀粉样蛋白A对3T3-L1脂肪细胞因子基因、蛋白及相关激酶表达的影响

作　者: 韩冠军
导　师: 朱大龙
学　校: 南京医科大学
专　业: 内科学
关键词: 2型糖尿病 急性时相血清淀粉样蛋白A 白细胞介素-6 肿瘤坏死因子-α 脂联素
分类号: R587.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:急性时相血清淀粉样蛋白A(Acute phase serum amyloid protein A, A-SAA)是近年来研究比较多的脂源性细胞因子,其在肥胖(obesity)和2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus)等慢性炎症患者血清中表达轻度升高。我们近年研究发现人重组A-SAA能够显著促进ECV304内皮细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)IL-6、IL-8 mRNA表达,且呈时间和剂量依赖性,但A-SAA对脂肪细胞炎症因子表达的影响目前尚不明确。本研究旨在探讨急性时相血清淀粉样蛋白A(A-SAA)对3T3-L1脂肪细胞因子白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-a (Tumor necrosis factor,TNF-α)和脂联素(adiponectin)基因、蛋白及相关激酶表达的影响。方法:体外培养、诱导分化3T3-L1前脂肪细胞(3T3-L1 preadipocytes),分别用不同浓度的人重组A-SAA(0μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、20μg/ml),在不同时间段(0、8h、24h、48h),干预分化成熟的3T3-L1脂肪细胞,用半定量逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测A-SAA对IL-6、TNF-α和adiponectin mRNA表达的影响;用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测条件培养基中上述脂肪细胞因子的表达变化;用免疫印迹法(Western Blot)检测A-SAA对相关激酶C-Jun氨基末端激酶( c-jun N-terminal kinase, JNK)和细胞外信号调节激酶(Extracellular signal-regulated kinase ,ERK)蛋白表达的影响。结果:1、与对照组比较,10μg/ml A-SAA和20μg/ml A-SAA分别干预8h后IL-6 mRNA的表达均显著升高(P<0.05和P<0.01),且20μg/ml A-SAA干预8h组该基因的表达较1μg/ml A-SAA干预8h组也显著升高(P<0.05);与对照组比较,三种浓度的A-SAA分别干预24h后IL-6 mRNA的表达均显著升高(P<0.01),且20μg/ml A-SAA干预24h组该基因的表达较1μg/ml A-SAA干预24h组也显著升高(P<0.01);分别与对照组比较,1μg/ml A-SAA和10μg/ml A-SAA分别干预不同时间后各组IL-6 mRNA表达均显著升高(P<0.05和P<0.01);与对照组比较,20μg/ml A-SAA干预8h组和干预24h组IL-6 mRNA表达显著升高(P<0.01),且20μg/ml A-SAA干预8h组较干预48h组也显著升高(P<0.05);2、与对照组比较,10μg/ml A-SAA干预24h后TNF-a mRNA表达显著升高(P<0.05);3、10μg/ml A-SAA干预24h,使3T3-L1细胞adiponectin mRNA的表达显著下降(P<0.05);4、不同浓度A-SAA干预不同时间后培养基中的TNF-a、IL-6和adiponectin的表达均没有显著变化(P均﹥0.05);5、A-SAA可能激活JNK和ERK。结论:A-SAA剂量依赖性地促进IL-6 mRNA的表达,10μg/ml A-SAA干预24h使TNF-a和IL-6 mRNA表达显著升高,同时显著降低adiponectin mRNA的表达;A-SAA对条件培养基中脂肪细胞因子蛋白的表达没有影响;A-SAA没有通过促进TNF-a和IL-6表达和(或)降低脂联素表达间接引起胰岛素抵抗,A-SAA可能通过激活MAPK信号通路,参与脂肪细胞的胰岛素抵抗。

全文目录


中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
引言  8-11
材料与方法  11-23
结果  23-41
分析与讨论  41-44
结论  44-45
参考文献  45-51
综述  51-65
  参考文献  58-65
附录  65-66
攻读学位期间发表文章情况  66-67
致谢  67

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 内分泌腺疾病及代谢病 > 胰岛疾病 > 糖尿病
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