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茶黄素形成的生化调控和分离纯化技术研究

作　者: 王坤波
导　师: 刘仲华
学　校: 湖南农业大学
专　业: 茶学
关键词: 茶黄素高效液相色谱法酶促氧化化学氧化分离纯化
分类号: O629
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
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内容摘要

茶黄素作为红茶的主要活性物质，具有多种药理功能与保健功效，在某些方面甚至优于儿茶素。茶黄素的分离纯化方法和制备工艺也一直是茶叶化学工程的研究重点。茶黄素研究与开发具有重要的理论价值和广阔的产业化前景。本文通过研究4种茶黄素组分的色谱行为、流动相的组成、梯度洗脱条件、检测波长和柱温对茶黄素分离的影响，建立了茶黄素分析的高效液相色谱法。该方法简便、快速、准确，样品的总分析时间在33分钟之内。色谱柱为C₁₈ Shim-pack VP-ODS；流动相A为2％醋酸（HAc），流动相B为乙腈（ACN）；乙酸乙酯（EtOAc）=21：3（v／v），梯度洗脱；柱温40℃；紫外检测波长280nm。被测组分与峰面积有良好的线性关系（r=0.9990-0.9992）；加标回收率在80.25％-89.79％；方法的精密度良好（平均RSD＜1.5％）。采用体外模拟发酵，对大叶种原料提制的儿茶素（以下简称大叶儿茶素，其中儿茶素含量为85.47％）进行酶促氧化，加入纯化的多酚氧化酶，通入氧气，并定时用高效液相色谱检测茶黄素的含量变化。结果表明，发酵80分钟时，茶黄素的生成量最高（为15.05％）。以K₃Fe（CN）₆／NaHCO₃为氧化剂，系统研究了儿茶素组成、儿茶素浓度、氧化剂比例对茶黄素形成的影响，通过分光光度法与HPLC法相结合对氧化产物的组成分析，结果表明：以大叶儿茶素为材料，浓度为10mg／ml，氧化剂的比例为2：3：1（儿茶素：K₃Fe（CN）₆：NaHCO₃）时，有利于茶黄素类物质的形成。本文以有机溶剂萃取制备的茶黄素粗品为试验材料，进行了大孔吸附树脂色谱法制备高含量茶黄素（茶黄素总量＞15％）的研究。选用8种物理和化学性质各不相同的树脂为吸附剂，应用色谱理论对静态和动态吸附过程中茶黄素含量与组分的变化作了系统研究。结果表明：以茶黄素粗品为原料，NKA为柱填充料，收集解吸液一定区段的馏分，真空浓缩、冷冻干燥，即可制得高含量茶黄素制品，得率为48.04％，茶黄素总量大于15％。此法纯化效果好，操作简便，为茶黄素的制备与分离提供了一条新的途径，也为高含量茶黄素的工业化生产提供了新的工艺技术。

全文目录

前言  8-14
材料及主要药品与仪器设备  14-16
  1 实验材料  14
  2 大孔吸附树脂  14
  3 主要化学药品  14
  4 主要仪器设备  14-16
研究内容与检测方法  16-19
  1 研究内容  16-17
  2 检测方法  17-19
    2．1 光密度测定  17-18
    2．2 茶黄素高效液相色谱检测方法  18
    2．3 儿茶素高效液相色谱检测方法  18-19
结果与分析  19-42
  1 茶黄素高效液相色谱检测方法的建立  19-26
    1．1 色谱柱的选择  19
    1．2 流动相的优化  19-21
    1．3 检测波长的选择  21-22
    1．4 柱温的选择  22-23
    1．5 定性分析  23
    1．6 定量分析  23-24
    1．7 精密度实验  24
    1．8 加标回收率  24-25
    1．9 红茶和红茶多酚样品中茶黄素的分析结果  25-26
  2 儿茶素的酶促氧化  26-27
  3 儿茶素的化学氧化  27-31
  4 茶黄素的提取和分离纯化  31-41
    4．1 茶黄素粗品的制备  31
    4．2 吸附树脂对茶黄素的静态吸附  31-34
    4．3 吸附树脂对茶黄素的动态吸附  34-39
    4．4 吸附操作条件的选择  39-41
  5 工艺放大试验效果分析  41-42
讨论  42-45
  1 茶黄素HPLC方法的建立  42
  2 儿茶素的酶促氧化  42-43
  3 儿茶素的化学氧化  43
  4 茶黄素的分离纯化新工艺  43-45
结论  45-46
参考文献  46-53
致谢  53-54
作者简介  54-55

茶黄素形成的生化调控和分离纯化技术研究

内容摘要

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