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腺苷对海马神经元钙振荡和高电压激活性钙通道电流的作用研究

作　者: 王媛
导　师: 朱遂强
学　校: 华中科技大学
专　业: 神经病学
关键词: 腺苷膜片钳激光扫描共聚焦显微镜高电压激活性钙通道电流钙振荡
分类号: R741
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:在细胞水平研究腺苷(Adenosine,Ade)对原代培养的SD大鼠海马神经元内钙振荡和细胞膜上高电压激活性钙通道电流(high voltage-activated calcium channel current,IHVA)的具体影响,并探讨其可能的作用机制,从而为腺苷的抗癫痫效应提供实验依据。方法:本实验以SD大鼠新生24h内的乳鼠作为取材对象,以胰酶消化加巴氏管机械吹打的方法,经条件培养基纯化建立原代培养海马神经元的研究模型。选取7-9天的细胞,应用全细胞膜片钳联合激光扫描共聚焦显微镜结合Fluo-3/AM标记技术,利用细胞外给予Ade的方法,检测Ade干预前后钙离子振荡和高电压激活钙通道电流的变化这两个指标。结果:(1)原代培养的SD大鼠乳鼠的海马神经元在7-9天发育基本成熟,应用激光共聚焦钙成像技术可以观察到神经元内自发同步的钙振荡。以细胞外灌流方式给予Ade后,激光扫描共聚焦显微镜发现:Ade能抑制成熟海马神经元自发同步钙振荡的频率和幅度:使其频率从加药前的(1.2±0.2)/min(0.02±0.003HZ)减少到(0.3±0.05)/min(0.005±0.001HZ),幅度从加药前的(1.87±0.17)下降到(1.0±0.07),且这种作用对于Ade的剂量水平有一定的依赖性。用高钾作为去极化刺激模拟癫痫状电活动时,钙震荡的频率加快,幅度增大,而Ade对高钾诱发钙振荡的频率和幅度表现出了显著抑制作用。(2)原代培养的SD大鼠海马神经元采用膜片钳技术在预设的刺激程序下可以记录到IHVA,其为一组缓慢失活的内向电流,可以被0.2mmol/L的CdCl2特异性阻断。以细胞外干预的方式加入Ade后,膜片钳观察到:Ade为0.1、1、10、50umol/L时可使IHVA的幅度呈浓度依赖性的分别被抑制(5.2±2.3) %(n=6,P>0.05),(8.1±1.9) %(n=6,P>0.05),(28.4±2.8)%(n=6,p<0.05),(43.5±4.3) % (n=6,p<0.05),可使I-V曲线上移,但对最大激活电位及峰值电位无明显影响。L型钙通道阻滞剂nifedipine可以减弱Ade对IHVA的影响。结论:在体外培养海马神经元的研究中发现:Ade对高电压激活性钙通道介导的钙内流及神经元内钙振荡均具有显著的抑制作用,这可能是Ade作为内源性物质发挥抗癫痫作用的具体机制之一。

全文目录

英文缩略词表  6-7
中文摘要  7-9
Abstract  9-11
前言  11-13
材料和方法  13-18
结果  18-23
讨论  23-27
全文小结  27-28
参考文献  28-31
综述  31-47
  参考文献  41-47
致谢  47-48

腺苷对海马神经元钙振荡和高电压激活性钙通道电流的作用研究

内容摘要

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