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Opsin3参与调节肺癌细胞紫杉醇耐药性的分子机制研究

作　者: 刘正霞
导　师: 朱昌亮
学　校: 南京医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 肺癌紫杉醇耐药视蛋白基因OPN3 GPCR Ras
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，严重危害人类健康，目前化学治疗为主要治疗手段。随着化疗药物的长期广泛使用，肺癌细胞对化疗药物易产生耐药，其常常导致化疗失败。研究表明，耐药相关基因的异常表达在肺癌耐药形成过程中起重要作用。因此，探讨肺癌耐药相关分子机制，对预防和逆转肺癌耐药、发现新的药物作用靶点和建立新的治疗方法具有重要的理论和现实意义，已成为当前肺癌防治研究的热点问题。本实验室前期研究表明，与蚊杀虫剂抗性相关视蛋白基因同源的人视蛋白基因3（opsin3,OPN3），与肺癌细胞紫杉醇耐药相关，即OPN3在紫杉醇敏感肺癌A549细胞和紫杉醇耐药肺癌A549_PTX细胞中差异表达，且紫杉醇敏感肺癌A549细胞高表达OPN3,，细胞对紫杉醇敏感性增加；紫杉醇耐药肺癌A549_PTX细胞低表达OPN3，细胞对紫杉醇敏感性降低。本研究分别对4组稳定转染细胞株（紫杉醇敏感肺癌A549高表达OPN3细胞株、紫杉醇耐药肺癌A549PTx低表达OPN3细胞株，及相应空载体对照细胞株）在紫杉醇处理状态下，采用G蛋白偶联受体（GPcR）信号通路基因芯片进行高通量筛选，研究OPN3对信号通路的影响：采用实时荧光定量PcR及weste¹1blot方法对芯片结果进行验证，并进一步通过western blot方法检测信号通路相关蛋白质表达差异，探讨OPN3参与调节肺癌细胞紫杉醇耐药性的分子机制。结果表明，高表达OPN3可以抑制Ras．ERK／IINK．IIun．cc’NDl信号通路蛋白质表达；低表达OPN3可以促进Ras．ERK／IINK．IIun．ccNDl信号通路蛋白质表达。本研究初步探讨了OPN3参与调节肺癌细胞紫杉醇耐药性的分子机制，首次发现OPN3可以负调控Ras信号通路相关蛋白质表达，为深入研究视蛋白基因参与肺癌细胞紫杉醇耐药的分子机制、发现新的肺癌基因治疗靶点奠定基础。

全文目录

中文摘要  5-6
英文摘要  6-8
前言  8-11
材料与方法  11-27
  一. 材料  11-16
    (一) 细胞系  11
    (二) 主要试剂  11-12
    (三) 主要溶液配方  12-15
    (四) 主要仪器  15-16
  二. 方法  16-27
    (一) cDNA芯片  16-19
    (二) 荧光定量PCR  19-23
    (三) Western Blot  23-27
结果  27-36
  一. 基因芯片  27-30
    (一) RNA提取  27
    (二) 芯片基本数据  27-28
    (三) 数据分析  28-30
  二. 荧光定量PCR  30-32
    (一) RNA提取  30
    (二) 细胞转染 OPN3高表达载体及低表达载体效果验证  30-31
    (三) 芯片基因表达水平验证  31-32
  三. Westem blot  32-36
    (一) 蛋白质定量  32-33
    (二) Western blot 定蛋白质表达差异  33-34
    (三) Western blol，信号通路研究  34-36
讨论  36-40
小结  40-41
参考文献  41-47
综述：肺癌基因治疗主要研究进展  47-68
  参考文献  59-68
附录  68-79
在读期间发表的文章  79-80
致谢  80-81

Opsin3参与调节肺癌细胞紫杉醇耐药性的分子机制研究

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